【摘 要】
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目的:羊传染性脓疱病毒主要侵害绵羊、山羊,具有接触传染性、嗜上皮性。患病羔羊口唇部位的皮肤和黏膜会形成丘疹、水疱、脓疱、溃疡和厚痂,因有开放性伤口,患病动物极易继发感染,对我国养羊业造成了巨大的危害。疫苗接种是预防和控制该病流行的最主要的方式,但市场上并无用于预防羊传染性脓疱的商品化疫苗。本试验旨在利用羔羊睾丸细胞制备羊传染性脓疱灭活疫苗并对孕羊和羔羊免疫接种后观察统计羔羊发病情况来对其免疫效果进
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目的:羊传染性脓疱病毒主要侵害绵羊、山羊,具有接触传染性、嗜上皮性。患病羔羊口唇部位的皮肤和黏膜会形成丘疹、水疱、脓疱、溃疡和厚痂,因有开放性伤口,患病动物极易继发感染,对我国养羊业造成了巨大的危害。疫苗接种是预防和控制该病流行的最主要的方式,但市场上并无用于预防羊传染性脓疱的商品化疫苗。本试验旨在利用羔羊睾丸细胞制备羊传染性脓疱灭活疫苗并对孕羊和羔羊免疫接种后观察统计羔羊发病情况来对其免疫效果进行评价。方法:分离培养羔羊睾丸细胞增殖羊传染性脓疱病毒,运用切向流超滤膜对病毒液进行10倍浓缩,并运用Reed-Muench法计算病毒液TCID50;建立羊传染性脓疱病毒荧光定量聚合酶链反应检测方法,对病毒液中病毒基因拷贝数进行检测,佐证浓缩效果;用β-丙内酯灭活病毒液,以1:1的比例将病毒液与206佐剂混合,制备羊传染性脓疱灭活疫苗,在常发羊传染性脓疱的羊场进行免疫试验并观察自然感染的发病情况。结果:（1）成功分离培养羔羊睾丸原代细胞,接种羊传染性脓疱病毒的细胞有明显细胞病变:接种病毒24 h后细胞边界模糊不清,48 h细胞核质颜色加深,72 h细胞大量脱落、细胞形态消失、细胞聚集似葡萄;（2）成功运用切向流超滤膜系统浓缩病毒液,对病毒液毒力进行测定,羊传染性脓疱病毒原液病毒滴度为106.3TCID50/0.1 m L,羊传染性脓疱病毒10倍浓缩液的病毒滴度为107.5TCID50/0.1m L;（3）成功建立羊传染性脓疱病毒荧光定量聚合酶链反应检测方法,标准曲线回归方程为y=-4.7x+53.3,对病毒原液、5倍病毒浓缩液、10倍病毒浓缩液及滤除液的病毒基因拷贝数进行检测,结果分别为6.6×10~4copies/μL、1.3×10~5copies/μL、3.9×10~5copies/μL和8.0×10~2copies/μL;（4）成功制备安全的羊传染性脓疱灭活疫苗,免疫后观察自然感染的发病情况,免疫组羔羊整体发病率28%,未免疫组羔羊发病率100%。结论:切向流超滤膜对羊传染性脓疱病毒原液进行10倍浓缩效果良好,对保留病毒粒子,提高病毒浓度效果显著。羊传染性脓疱病毒荧光定量聚合酶链反应检测方法可简便快速定量检测病毒基因拷贝数。羊传染性脓疱灭活疫苗对本试验的常发羊传染性脓疱羊场的羔羊保护效果显著。
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