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目的:探讨在毕赤酵母中表达的恶性疟原虫(HN株)重组蛋白次黄嘌呤—鸟嘌呤—黄嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine-Guanine-Xanthine,HGXPRT)免疫应答特性和免疫保护作用。
材料和方法:对可能含有目的蛋白的样品进行蛋白质印迹分析(WesternBlotAnalysis);通过高效液相层析系统对表达产物进行纯化;分别以ISA720和FREUND为佐剂,恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT经后腿皮下免疫BALB/c小鼠3次,间隔3wk;每次免疫后第十天经尾静脉采血,通过ELISA检测免疫血清中的特异性抗体;以间接免疫荧光实验(IFA)分析免疫血清对恶性疟原虫天然抗原的识别情况;并于第三次免疫后10天经腹腔对小鼠攻击感染105约氏疟原虫致死株;攻击感染后每隔24小时观察小鼠血液中原虫率的动态变化。
结果:通过高效液相层析系统对表达产物进行纯化,表达产物纯度达到90﹪以上;佐剂加HGXPRT给小鼠免疫后均诱导出针对抗原HGXPRT体液免疫应答,3次免疫后血清中特异性抗体滴度达到105以上;HGXPRT所诱导的血清能识别恶性疟原虫天然抗原;用约氏疟原虫致死株攻击感染后第四天各组平均原虫率有显著差异(F检验,P<0.01),攻击感染后第三天、第四天、第五天以ISA720为佐剂的实验组小鼠平均原虫率明显低于对照组和空白组的平均原虫率(T检验,P<0.01);以FREUND为佐剂的实验组小鼠平均原虫率亦明显低于对照组(T检验,P<0.01)。
结论:在毕赤酵母菌中表达的恶性疟原虫(HN株)重组蛋白HGXPRT具有很强的免疫原性,能诱导实验动物产生很强的体液免疫;动物免疫血清能很好的识别恶性疟原虫天然蛋白;在疟原虫的攻击感染实验中具有一定的免疫保护作用.