PRRSV国内分离毒株病毒结构蛋白抗原表位鉴别及其ORF5的RFLP分析

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:Water_E
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本研究通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)国内分离毒株的GP3、GP5和N蛋白的抗原性比较及其ORF5和ORF7遗传变异性分析,系统研究了国内分离毒株的抗原特性和遗传学差异。采用IFMA、RT-PCR及RFLP方法对国内分离毒株的GP3、GP5和N蛋白抗原多样性及其ORF5和ORF7的遗传变异性进行了比较研究。主要目的是通过针对GP3、GP5和N蛋白单抗对PRRS分离毒株的抗原表位进行鉴定,比较其抗原性差异,试验结果表明国内PRRSV分离毒株与美洲毒株VR-2332在结构蛋白上有很高的同源性,而与欧洲型毒株LV在抗原上差异较大:利用2套针对PRRSVORF7特异性引物扩增了国内分离毒株的ORF7片段,通过琼脂糖凝胶电泳与欧洲型(A型)、美洲型(B型)PRRSV的ORF7片段比较,证明国内分离毒株的基因型属于美洲型(B型)。在此基础上,扩增各毒株的ORF5基因,用MluⅠ,HincⅡ和SacⅡ限制性内切酶切割ORF5基因,通过这3种限制性内切酶获得了各毒株的ORF5基因限制性酶切图谱,经RFLP分析表明国内分离毒株与美洲型强毒株有着相同的RFLP图谱,而与疫苗毒的RFLP图谱存在明显差异,进一步证明国内分离毒株的基因型属于美洲型的强毒株。由此可见,通过比较分离毒株ORF5的RFLP图谱,可以对PRRSV(B型)强、弱毒进行区分。本研究为分离毒株的抗原特性研究、基因型(血清型)的鉴定及强、弱毒的鉴别提供了强有力的技术手段。
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