肿瘤新生血管内皮细胞的分选及成瘤研究

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肿瘤是造成人类死亡最严重的因素之一。肿瘤的快速生长、浸润与转移是造成多数癌症患者死亡的主要原因。肿瘤的发生发展除去其自身的生长因素外,肿瘤微环境也对其起了重要的作用。1971年Folkman教授提出假说,认为肿瘤的生长转移需依赖于新生血管的生成,所以新生血管生长与肿瘤的发生发展及转移密不可分。Endoglin又名CD105,是一种与内皮细胞增殖相关的膜糖蛋白,也是调节转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)受体复合物的成分之一,在肿瘤新生血管内皮细胞中异常高表达,但在肿瘤实质细胞和正常内皮组织细胞中低表达甚至不表达。因此,CD105可作为肿瘤新生血管内皮细胞的特异性标志物及肿瘤诊断、转移、复发和判断预后的指标,是治疗人体恶性肿瘤的理想的分子靶位。因其与肿瘤的浸润、转移密切相关,针对CD105的各种策略将成为诊断、治疗肿瘤的重要手段。为了探究肿瘤新生血管内皮细胞的生物学特性及其与肿瘤细胞是否有相似性,本研究构建了荷瘤小鼠模型,从模型中分离获得了肿瘤新生血管内皮细胞,并对其进行表型及功能鉴定。然后,将肿瘤新生血管内皮细胞接种于BALB/c Nude鼠皮下研究其致瘤特性。目的:从移植瘤中分选出肿瘤新生血管内皮细胞,对其进行鉴定和生物学特性研究,并探讨其侵袭、转移粘附及致瘤特性。方法:首先,用BALB/c Nude鼠构建肺癌(A549)移植瘤模型,通过HE染色和CD105免疫荧光验证CD105的表达部位。再通过抗人CD105磁珠分选试剂盒分选得到肿瘤新生血管内皮细胞,并用流式细胞术和免疫荧光技术检测分选纯度。接着,采用Dil-ac-LDL吞噬实验和Matrigel胶成管实验验证肿瘤新生血管内皮细胞的功能特性,并用CCK-8增殖实验检测其增殖能力。然后,通过体外侵袭实验和划痕实验检测肿瘤新生血管内皮细胞的侵袭能力与迁移能力。通过与肿瘤细胞的粘附实验检测肿瘤新生血管内皮细胞粘附肿瘤细胞的能力。随后,通过在BALB/c Nude鼠皮下注射肿瘤新生血管内皮细胞检测其致瘤能力。最后,组织病理学HE染色检测肿瘤新生血管内皮细胞成瘤组织病理学特征。结果:成功构建了荷瘤小鼠模型,通过HE染色和CD105免疫荧光验证了CD105在肿瘤血管中特异性表达。分析流式结果,经磁珠分选出的肿瘤新生血管内皮细胞表达CD105,表达率达到90%以上。免疫荧光结果显示,肿瘤新生血管内皮细胞膜表面表达CD105蛋白。内皮细胞吞噬实验和Matrigel成管实验结果显示,肿瘤新生血管内皮细胞具有内皮细胞吞噬功能和成管功能。CCK-8实验结果显示,肿瘤新生血管内皮细胞增殖能力强于HUVEC细胞,弱于A549细胞。侵袭实验结果提示肿瘤新生血管内皮细胞的侵袭能力与肿瘤细胞相似,强于正常内皮细胞。划痕实验结果提示肿瘤新生血管内皮细胞的迁移能力与肿瘤细胞相似,强于正常内皮细胞。与肿瘤细胞的粘附实验结果显示肿瘤新生血管内皮细胞粘附肿瘤细胞的能力强于正常内皮细胞。皮下致瘤实验和组织病理学结果提示肿瘤新生血管内皮细胞具有成瘤能力。结论:本研究建立了荷瘤小鼠模型,成功分选出肿瘤新生血管内皮细胞。分选出的肿瘤新生血管内皮细胞不仅具有内皮细胞生物学功能,还具有与肿瘤细胞相似的侵袭、迁移及成瘤能力。
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