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目的:1.研究膜锚定补体调节蛋白(Membrane-bound complement regulatory proteins,mCRPs)CD46,CD55和CD59在口腔扁平苔藓(Oral lichen planus,OLP)局部病变组织中的表达,探索mCRPs与OLP发病的相关性。2.体外实验研究mCRPs在体外分离培养的原代OLP口腔角质形成细胞中的表达,并探索不同浓度及不同时间脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激对CD46,CD55和CD59转录水平的影响。进一步探讨mCRPs表达异常与OLP的相关性,为OLP的发生机制及早期诊治提供新思路。方法:1.实验组纳入37例OLP患者(非糜烂型20例,糜烂型17例),对照组纳入20例健康对照者,并对OLP患者口内病损程度进行REU评分。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blotting检测CD46,CD55和CD59 mRNA和蛋白在OLP病变组织中的表达,酶联免疫吸附实验检测OLP患者血清及唾液中补体C3和sC5b-9的表达水平以评估补体激活状态,并分析以上各指标与REU评分的相关性。2.另纳入3例非糜烂型OLP作为实验组,3例健康对照者作为对照组。收集各组口内黏膜组织,通过中性蛋白酶消化法体外分离培养OLP原代角质形成细胞,免疫细胞化学法和形态观察法对培养的角质形成细胞进行鉴定。免疫荧光进一步检测mCRPs在细胞水平的表达。LPS(0,0.1,1,10,20μg/mL)刺激角质形成细胞HOK 24 h及48 h后,RT-qPCR检测CD46,CD55和CD59 mRNA的表达变化。结果:1.RT-qPCR结果显示,OLP组织中CD46,CD55和CD59 mRNA较正常对照组均显著下降(P<0.01),但糜烂型与非糜型病例组间无明显差异(P>0.05)。Western blotting结果显示,糜烂型OLP组CD46和CD55蛋白表达水平明显降低(P<0.05),非糜烂型OLP组CD46和CD55蛋白表达水平较对照组无明显差异(P>0.05)。糜烂型及非糜烂型OLP组CD59蛋白表达与对照组相比均未见显著差异(P>0.05)。ELISA结果显示,OLP组血清中C3及sC5b-9含量较正常对照组无明显差异(P>0.05),唾液中补体C3显著下降(P<0.05),sC5b-9含量增高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,在糜烂型OLP中,唾液C3和REU评分呈负相关(r=-0.8098,P=0.0148),余指标与REU评分未见明显相关性(P>0.05)。2.体外成功分离培养OLP原代角质形成细胞,形态学观察及角蛋白免疫细胞化学染色显示培养的细胞为单一的口腔角质形成细胞。免疫荧光染色显示,与正常对照组相比,OLP角质形成细胞中mCRPs表达均显著降低(P<0.01)。RT-qPCR结果显示,LPS刺激HOK 24 h后,CD46转录水平仅在20μg/mL浓度刺激时下降明显(P<0.05),CD55和CD59表达水平在低浓度刺激下稍增高,20μg/mL刺激时稍降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。LPS刺激HOK细胞48 h后,CD46及CD59表达均明显降低(P<0.05),CD55仅在0.1μg/mL浓度刺激下表达水平明显下降(P<0.05)。结论:1.OLP存在mCRPs表达水平降低及局部补体系统的异常激活。2.体外细胞实验进一步证实分离培养的OLP原代角质形成细胞存在mCRPs表达降低的现象。3.G-细菌毒力物质LPS刺激可使m CRPs表达下调,细胞更易受到补体攻击,可能与OLP上皮基底层细胞的凋亡有关。