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大黄酸是中药大黄以及许多药用植物的生物活性成分。它的前药双醋瑞因常与低剂量的甲氨蝶呤联合使用,治疗类风湿性关节炎。尽管用途广泛,因服用含大黄酸类中草药引起不良反应的相关报道层出不穷。本文旨在研究大黄酸是否会发生代谢活化,并且进一步探索甲氨蝶呤与大黄酸合用时潜在的药物-药物相互作用。大黄酸与不同种属的肝微粒体共孵育后,产生三个大黄酸的葡萄糖醛酸结合产物（RG1、RG2和RG3）,分别对应于大黄酸的两个羟基以及一个羧基的葡萄糖醛酸代谢产物。大黄酸酰基葡萄糖醛酸（RG3）被进一步证明具有化学反应活性,并且对HepG2细胞有细胞毒性。此外,RG1、RG2和RG3的相对量在人、猴、犬、小鼠和大鼠肝微粒中呈现截然不同的特征,表明大黄酸的葡萄糖醛酸结合反应具有显著的种属差异。人肝微粒体（HLMs）和人重组尿苷-5’-二磷酸-葡萄糖醛酸转移酶（UGTs）催化RG1、RG2和RG3的生成速率-浓度曲线都符合经典米-曼氏动力学方程。HLMs催化RG3生成的Vmax最大,但是催化RG1、RG2和RG3生成的Km值相似（分别为77.37±9.98、52.20±5.96和49.68±3.85μM）。因此,HLMs催化时,大黄酸通过生成RG3途径清除的固有清除率明显比通过生成RG1和RG2途径清除的高得多。酶表型鉴定实验表明RG3的生成主要由UGT1A1、1A9和2B7介导,UGT1A1、1A7、1A8和1A9主要催化RG2的生成,UGT1A1、1A7、1A8、1A9和1A10主要催化RG1的生成。催化大黄酸生成RG3时,UGT1A1的亲和力最强,它对应的Km值（14.81±2.29μM）最小、Vmax最大,其次是UGT1A9（Km值为20.86±2.10μM）和2B7（Km值为66.77±8.73μM）。RG3作为大黄酸在体循环中的主要代谢产物,能够显著地抑制hOAT1介导对氨基马尿酸和hOAT3介导硫酸雌酮的转运,IC50值分别为691.40±1.08 nM和78.46±1.30 nM。甲氨蝶呤是hOAT1和hOAT3的底物,50μM RG3能抑制69%hOAT1介导甲氨蝶呤的转运,1μM RG3能抑制87%hOAT3介导甲氨蝶呤的转运。体内实验结果显示大鼠同时服用甲氨蝶呤和RG3后,甲氨蝶呤的AUC0-24值从3108.9±304.5ng/mL*h增加至5370.6±723.7 ng/mL*h,t1/2延长了40.5%（从7.4±2.1 h延长至10.4±6.9 h）,表明RG3能够抑制甲氨蝶呤的排泄过程。综上所述,当前的研究证明大黄酸可以通过酰基葡萄糖醛酸结合反应而发生代谢活化,尤其是在人体中。而且大黄酸酰基葡萄糖醛酸能显著地抑制hOAT1和hOAT3介导甲氨蝶呤的转运。因此,在临床上,大黄酸、双醋瑞因或其它的含大黄酸类中草药与甲氨蝶呤联合应用时需要密切监测。