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目的探究酪氨酸激酶BTK在心脏纤维化发生发展过程中的调控的作用并探索其具体机制,丰富心脏纤维化的发生机制,为高血压或瓣膜病等心肌损伤相关疾病的治疗策略提供新的潜在靶点。方法1.构建心脏纤维化模型:取8-10周的btk-/-(KO)小鼠和野生型小鼠(WT)分别皮下注射ISO(5mg/kg/d,连续7天)或皮下植入AngⅡ泵(1000ng/kg/min,连续28天)。2.观察BTK分子在WT心脏纤维化模型的心脏组织以及TGF-β活化的心脏成纤维细胞中的表达情况。3.观察WT和KO小鼠心脏纤维化模型的心功能、心脏重构和心肌纤维化的差异;检测纤维化相关信号通路活化的差异。4.体外分离WT和KO胎鼠的心脏成纤维细胞,TGF-b刺激后观察观察纤维化相关分子表达、信号通路活化以及肌成纤维细胞的转化情况差异。5.体外分离WT胎鼠心脏成纤维细胞,使用BTK抑制剂Acalabrutinib处理,观察纤维化相关分子的表达、信号通路活化以及肌成纤维细胞转化情况差异。6.利用免疫共沉淀技术,寻找BTK作用的靶分子并研究其作用机制。结果1.BTK的表达水平在心脏纤维化小鼠模型的心脏组织中显著升高,在TGF-b活化的心脏成纤维细胞中也显著升高。2.心脏纤维化模型中KO小鼠的心功能较WT小鼠显著改善,心脏组织内胶原沉积程度和纤维化分子的表达水平较WT小鼠显著降低,TGF-β信号通路分子的活化水平也低于WT小鼠。3.KO小鼠来源的心脏成纤维细胞中TGF-β诱导的纤维化相关分子的表达水平和肌成纤维细胞的转化程度都较WT成纤维细胞降低;TGF-β信号通路分子的活化水平也低于WT成纤维细胞。4.BTK抑制剂Acalabrutinib能下调心脏成纤维细胞中TGF-β诱导的纤维化相关分子的表达水平、肌成纤维细胞的转化程度和TGF-β信号通路分子的活化水平。5.BTK能结合TGF-β的受体TRβ1,且促进TRβ1胞内区磷酸化。结论1.BTK促进小鼠心肌的纤维化,降低心功能,加重心脏不良重构。2.BTK增强心脏成纤维细胞中纤维化相关分子的表达,促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。3.BTK结合TGF-β受体TRβ1并促进其磷酸化,增强TGF-β信号通路的活化,从而促进心脏成纤维细胞介导的心肌纤维化。