鹅腺病毒的分离鉴定、E3区序列分析和人工致病性初步研究

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本研究以养殖场、临床病料、采集雏鹅或成年鹅的泄殖腔分泌物或肠道、肝脏、脾脏作为分离样品,通过离心和抗生素处理灭菌后,接种鸭胚,以血球凝集(HA)和血球凝集抑制(HI)的试验方法检测病毒。试验结果表明,50份样品中有2份样本分离到腺病毒,分离率为4%。将分离到的两株分离物病毒分别命名为H5J24和N8J8。HA和HI试验结果表明,该2株分离物病毒能够凝集鸡、鸭、鹅的红细胞,且这种凝集作用可被抗Y81G4株鹅腺病毒多抗血清所抑制,但抗新城疫(ND)病毒的单克隆抗体(单抗)、抗H5和H9亚型禽流感病毒(AIV)的单抗对其无抑制作用。透射电镜进行经形态学观察,结果发现大小约为78nm、球形、无囊膜的病毒粒子。理化特性测定结果表明,分离到的病毒血凝素蛋白对50%氯仿、0.25%胰酶、pH3.0和pH9.0处理1小时以及50℃ 30分钟表现稳定,而60℃ 45分钟和100℃ 1分钟可使其失活。根据Ⅲ群腺病毒EDS标准毒株基因组序列,设计并合成一对可扩增出E3区的PCR引物,实验证明可以扩增出特异性核酸片段。这些结果证明该两株分离物病毒为Ⅲ群禽腺病毒。 腺病毒E3区两端分别是保守性较强的pⅧ蛋白基因和纤维蛋白基因。通过特定的引物,用PCR方法从2株鹅腺病毒基因组中扩增出E3区并进行了序列测定。结果表明,这2株病毒分离物E3区的长度较短,全长约为240扬州大学硕士论文个核昔酸,不具有明显的编码框。与EDS一76以及其他腺病毒的E3区比较结果提示,此2株鹅腺病毒应归类于m群禽腺病毒。 为了弄清楚这2株病毒的病原性,我们通过肌肉注射感然8日龄肉鹅,进行人工致病性实验.结果发现,实验鹅在感染病毒后,未出现任何明显临床症状,提示两株病毒的病原性较弱。对这些人工感染鹅进一步研究,通过在不同时间段的排毒、带毒情况及血清中抗体水平检测,证明病毒能够在实验鹅体内存在并持续排毒,同时实验鹅血清中循环抗体能够较长时间维持在2”一2”的较高水平.组织病理学切片观察结果表明,病毒可以在内脏组织器官引起一定的病理变化.如肾小管上皮细胞颗粒变性,有些细胞出现脂肪变性,有些发生充血或轻微出血;肺三级支气管上皮细胞坏死脱落,管腔内有脱落的上皮细胞及淋巴细胞,肺房有大量红细胞及少盘的淋巴细胞:脾脏有轻度充血和出血;小肠部分猫膜层与肌层剥离,肠猫膜上皮细胞坏死、脱落,小肠官腔内有坏死脱落的上皮细胞,有的肠绒毛脱落,固有层肠腺体上皮细胞发生水泡性变性,固有层、猫膜下层有淋巴细胞浸润,肌层血管有充血;肝细胞水泡变性、坏死.这些结果提示,我们分离到的两株分离物病毒对小鹅没有临床致病作用,但仍有一定的毒力。
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