为解决供体器官的不足，以细胞移植为基础的替代疗法已成为治疗不可逆肝脏疾病新的希望。肝前体(干)细胞(Hepatic progenitor cellS，HPCs)和胚胎干细胞(embryoic stem cells，ES)由于其特殊的细胞特性已成为细胞替代治疗理想的种源细胞。然而一方面包括人在内的灵长类动物的正常成体肝来源的HPCs的分离依然是很困难的；另一方面，ES细胞来源的肝细胞和胆管细胞的生成效率依旧很低。因此有必要建立稳定的高效的灵长类动物HPCs细胞分离培养体系及ES细胞的肝细胞或胆管细胞分化体系以满足供体细胞的不足；这种体系的建立还有利于研究肝细胞生物学如分化机制、自我更新机制等方面的重要基础问题。　　 本研究以猕猴为实验模型，研究了正常成体肝来源的猕猴HPCs分离、纯化的条件，系统地鉴定了猕猴HPCs的细胞特性和体内、外分化潜能，并评价了体内移植效果。同时以rES为材料，建立了rES高效分化为限定性内胚层(definitive endoderm cells，DE)和胆管上皮细胞的分化体系。主要实验结果包括：1)： FBS、EGF、HGF及rat tail collagen(鼠尾胶原)是分离培养正常成体猕猴来源的肝上皮前体细胞(rhesus monkey liver epithelialprogenitor cells，mLEPCs)所必需的，mLEPCs在此培养体系中至少可以扩增20代或5个月以上，并仍然保持原有的细胞特性；mLEPCs呈现典型的上皮细胞形态，并表达HPCs细胞特有的表达模式即同时表达肝细胞和胆管细胞相关基因(ALB，APOH，CX43，IB4)或蛋白(CK7，CK8，CK18)；在适宜的分化体系下，mLEPCs可分化为功能性的肝细胞，形成具有胆管上皮细胞的胆管样结构，并能转分化形成肌肉样细胞、肌样成纤维细胞及少突样细胞；移植入肝损伤的免疫抑制的小鼠体内后，mLEPCs能参与受体肝组织的再生，并能分化成ALB阳性的肝细胞；体内定位发现mLEPCs与胆管区的细胞有相似的免疫原性，提示mLEPCs可能来源于胆管区。2)：rES在高浓度的acitvin A(100ng/ml)和低浓度的血清(1％)单层诱导体系下可定向分化得到高比率的限定性内胚层细胞(definitiveendoderm cells，DE细胞)(约80％)；高比率的DE细胞的得到还与rES细胞的接种密度相关；BMP4和FGF1可诱导DE细胞高效向胆管上皮细胞分化(约90％)，但并不能得到肝细胞；而Notch信号通路可维持DE细胞的存活，并决定着DE细胞向胆管细胞分化，在Notch信号通路失活的情形下，即使存在BMP4和FGF1都不能促使DE细胞向胆管细胞分化。　　 本实验首次成功建立了正常猕猴成体肝HPCs分离培养体系，证实了分离得到的猕猴肝上皮前体细胞不但具有正常HPCs的增殖活力和参与受体肝组织的再生能力，而且还具有三个胚层的分化潜能，这一结果将为以HPCs为基础的细胞替代治疗人类肝脏疾病的实现提供了可能，并首次证明了HPCs也可以像某些少数成体干细胞一样具有三个胚层得分化潜能。此外，本研究建立了rES高效定向分化为DE细胞和胆管细胞的分化体系，这一方法的建立将促进灵长类动物的DE细胞的发育机制研究，同时也可为高比率的内胚层功能细胞(如胰岛细胞、肝细胞、肺细胞)的获得提供丰富的种源细胞和平台。