研究背景及目的: 偏头痛是一种慢性、反复发作性的血管神经性头痛，主要表现为一侧或双侧头部搏动性疼痛、中枢神经系统功能紊乱，严重影响患者的工作和生活质量。偏头痛的病因及发病机制目前尚末完全明了，在众多假说中脑干三叉神经血管学说占有重要地位，脑干特别是三叉神经脊束核尾部、C1、C2节段脊髓后角浅层及三叉神经节在疼痛的传递过程中有重要作用。 Rho家族GTP酶是ras超家族的一员，Rho通过激活下游靶分子-Rho激酶调节细胞的多种生物学行为和功能，Rho激酶属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员，以两种同源性极高的异构体形式存在(ROCKα/ROCK Ⅱ和ROCK β/ROCK Ⅰ)，其中ROCK α/ROCK Ⅱ主要在脑组织中表达。Kansu Buyukafsar等在大鼠伤害性刺激模型中发现脊髓及脑内的Rho激酶蛋白水平明显增高。Matsumura等在神经痛大鼠模型中发现Rho激酶可以使富含十四酰丙氨酸的C激酶底物(Myristoylated alanine-rich C-kinase substrate，MARCKS)159位点的丝氨酸磷酸化，进而增加脊髓神经型一氧化氮合酶(neural nitric oxide synthase，nNOS)的活性，导致一氧化氮(nitric oxide，NO)释放增加，在疼痛的传递中起重要作用。Tatsumi等也发现Rho激酶通过磷酸化MARCKS而增加脊髓内nNOS的活性，参与了炎症及神经痛的发病过程。 NO是目前公认的在偏头痛发病过程中起关键作用的分子，它既可以扩张血管产生头痛，又可以做为信号转导分子，参与疼痛的传递及中枢高敏感性的形成。目前认为延迟性的头痛与三叉神经血管系统nNOS活性增加，催化生成的NO协同其它神经递质将疼痛刺激向中枢传递有关，NOS抑制剂可部分抑制神经源性硬脑膜血管扩张及降钙素基因相关肽(calcitonim gene-related peptide，CGGR)的释放而治疗偏头痛。 氟桂利嗪是一种新型的长效钙离子拮抗剂，被公认为是预防偏头痛的一线药物。临床双盲对照研究表明，该药可以有效减少偏头痛发作的频率及头痛的严重程度，但氟桂利嗪预防偏头痛发作的机制目前不明。 本研究将从ROCK Ⅱ、磷酸化MARCKS、nNOS着手，首先建立硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型，并同步设立生理盐水对照组及药物干预组，检测脑干及三叉神经节组织中上述各物质mRNA及其蛋白的表达，并比较它们在发作期与间歇期的表达变化，以初步探讨ROCK Ⅱ、磷酸化MARCKS、nNOS在偏头痛发病机制中的作用。 方法: 1.动物分组及处理：采用清洁级成年雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠为实验对象，随机分为3组，模型组：依Tassorelli法皮下注射硝酸甘油10mg/kg，每周1次，共5周，制作实验性偏头痛大鼠模型，并于第二次造模后给予生理盐水10ml/kg/d灌胃，共4周；对照组：与模型组同步对照，以生理盐水代替硝酸甘油皮下注射；干预组：自硝酸甘油第二次造模后，给予氟桂利嗪5mg/kg/d灌胃，共4周。 2.受试动物于第5次造模后3小时(发作期)或第4天(间歇期)分别断头处死，取大鼠脑干及三叉神经节组织，液氮内保存。 3.RT-PCR法半定量检测大鼠脑干及三叉神经节组织ROCK Ⅱ、MARCKS、nNOS mRNA的表达。 4.Western-Blot法检测大鼠脑干及三叉神经节组织ROCK Ⅱ、磷酸化MARCKS、nNOS蛋白的表达。 结果: 1.在偏头痛发作期，模型组及干预组大鼠脑干及三叉神经节组织中ROCK II mRNA及蛋白的表达均明显高于间歇期和对照组(p<0.05)；而在偏头痛间歇期，各组表达无明显差异(p>0.05)。 2.与对照组相比，在偏头痛发作期及间歇期，模型组和干预组大鼠的脑干及三叉神经节组织中MARCKS mRNA的表达无变化(p>0.05)；pSl59-MARCKS蛋白的表达在间歇期亦无明显变化(p>0.05)，而在发作期明显上调(p<0.05)。 3.与对照组相比，在偏头痛发作期及间歇期，模型组及干预组大鼠脑干及三叉神经节组织中nNOS mRNA的表达无变化(p>0.05)；而模型组nNOS蛋白的表达在发作期明显上调(p<0.05)，干预组也稍有上调，但无统计学意义(p>0.05)；在间歇期，模型组及干预组nNOS蛋白的表达均无明显变化(p>0.05)。 结论: 1、ROCK II mRNA及蛋白、磷酸化MARCKS及nNOS蛋白表达的上调可能与偏头痛的发生发展有关。 2、氟桂利嗪预防偏头痛发作的机制之一可能是通过下调nNOS蛋白的表达。