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目的旨在研究Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）阻断剂和核转录因子（nuelear factor kappa B,NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（pyrrolidinedithioearbamate,PDTC）作用于脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的人牙周韧带细胞（Human Periodontal Ligament Cells,HPDLCs）后,细胞因子IL-1β与IL-8分泌的改变和细胞内NF-κB的核转位变化情况,以其探讨TLR-NF-κB信号途径在牙周损伤中的机制。方法采用组织块直接贴壁培养法分离培养人牙周韧带细胞,取对数生长期的第3-6代细胞用于后续实验。将培养细胞分为四组。对照组:细胞于DMEM（1%FBS）培养基中培养;LPS组:细胞于LPS浓度为10μg/ml的DMEM（1%FBS）培养基中培养;TLR4组:TLR4阻断剂10μg/ml预处理细胞30min,加入含10μg/mL LPS的DMEM（1%FBS）培养液;PDTC组:分别以PDTC10μmol/ml、100μmol/ml、1000μmol/ml预处理细胞30min,加入含10μg/mL LPS的DMEM（1%FBS）培养液。所有各组细胞37℃、5%CO2培养24小时后,酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞上清液中白介素-1β（interleukin 1β,IL-1β）、白介素-8（intefleukin 8,IL-8）的分泌量的改变。制备上述各组的细胞爬片,免疫荧光检测干预前后细胞内TLR4和NF-κB的表达改变。结果1.10μg/mlTLR4阻断剂预处理HPDLCs30min,细胞上清液中分泌的IL-1β和IL-8的含量均下降,与未阻断之前相比差异具有统计学意义（P<0.05）。2.PDTC浓度高于50μmol/ml时作用细胞24h后可见HPDLCs呈现凋亡的形态学改变。与对照组相比较,不同浓度PDTC均抑制HPDLCs生长。1000μmol/ml,200μmol/ml浓度与其他浓度组OD值相比具有显著性差异（P<0.05）,其余各浓度组之间OD值差异无显著性（P>0.05）。3.10μmol/ml PDTC预处理30min对HPDLCs分泌IL-1β和IL-8无影响;100μmol/ml和1000μmol/ml浓度均可抑制IL-1β与IL-8的分泌,1000μmol/m浓度的抑制作用更强,与其它各组相比具有显著性差异（P<0.05）。4.免疫荧光显示TLR4在HPDLCs的胞质中表达,为绿色荧光;LPS刺激前后其表达无明显改变;TLR4阻断剂预处理后细胞内未见明显的TLR4荧光显色。LPS刺激HPDLCs后NF-κB染色可见胞核内呈现较强的绿色荧光,胞浆内染色较弱;TLR4阻断剂和PDTC预处理后细胞核NF-κB的表达明显减弱或消失。结论1.TLR4存在于HPDLCs表面且能够识别细菌的LPS。2.PDTC能够抑制HPDLCs增殖,促进细胞凋亡。3.TLR4阻断剂和PDTC均可以抑制LPS刺激的HPDLCs IL-1β与IL-8的分泌和细胞内NF-κB的核转移,说明TLR4—NF-κB信号通路在牙周病的发生过程中具有重要作用,阻断该通路可能为牙周病的辅助治疗开辟新的途径。