【摘 要】
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【研究背景与目的】胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）是成人中最常见和最具侵袭性的原发脑肿瘤,初诊后中位生存期仅12-15个月,对放化疗耐药是胶质母细胞瘤切除术后复发及治疗失败的主要原因。二甲双胍（metformin,MET）是治疗2型糖尿病的一线药物,研究表明MET可通过激活腺苷酸激活蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）,抑制哺乳动物雷帕霉素
【基金项目】
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湖南省自然科学基金科卫联合项目（2021JJ70044）； 湖南省自然科学基金面上项目（2018JJ2353）；
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【研究背景与目的】胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）是成人中最常见和最具侵袭性的原发脑肿瘤,初诊后中位生存期仅12-15个月,对放化疗耐药是胶质母细胞瘤切除术后复发及治疗失败的主要原因。二甲双胍（metformin,MET）是治疗2型糖尿病的一线药物,研究表明MET可通过激活腺苷酸激活蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）,抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Mammalian target of rapamycin,m TOR）功能,从而抑制GBM细胞增殖、降低侵袭性,但MET单药抑制GBM因实际使用浓度超过药品说明书中人体耐受的剂量（2550mg/d）而局限于基础实验。青蒿琥酯（Artesunate,ART）可产生活性氧（Reactive oxygen species,ROS）激活AMPK-m TOR,进而导致肿瘤细胞自噬激活。MET是否可与ART联合,减少MET毒副作用的同时抑制GBM?本研究中采用人脑胶质母细胞瘤细胞系U251、U118分别与MET、ART单药或两药联合作用,探讨MET联合ART用药是否可在减少MET用量的同时抑制GBM细胞活力、单克隆、迁移、侵袭转移能力,其机制是否通过激活ROS-AMPK-m TOR轴诱导胶质母细胞瘤细胞自噬依赖性凋亡,从而起到抑制胶质母细胞瘤的作用。【方法】1.培养脑胶质母细胞瘤细胞系U251、U-118MG。2.分别施加MET单药组、ART单药组、MET+ART联合用药组后,培养并观察24、48h,测出MET、ART单药抑制率,筛选出所有联合用药组合中具有最高协同作用的药物组合。3.通过CCK8、细胞划痕、集落形成和Transwell实验检测ART联合MET用药对GBM细胞活力、侵袭、迁移、转移能力的影响。4.进行细胞内ROS检测、流式细胞术实验、自噬双标慢病毒转染,观察药物干预后细胞内ROS含量及凋亡和坏死水平,进行WB实验检测联合用药后细胞内AMPK、p-AMPK、m TOR、p-m TOR、Caspase-9、LC3、p62等指标水平变化。【结果】1.MET 20m M联合ART 75μM具备最高协同作用的同时可有效抑制GBM细胞活力、单克隆、迁移、侵袭转移能力。2.MET联合ART诱导GBM细胞ROS上调、激活AMPK磷酸化、抑制m TOR磷酸化、上调LC3II/I、下调p62及Caspase-9。【结论】1.二甲双胍联合青蒿琥酯可在减少二甲双胍用量的同时显著抑制胶质母细胞瘤细胞活力、单克隆、迁移、侵袭转移能力。2.二甲双胍联合青蒿琥酯可能通过激活ROS-AMPK-m TOR轴诱导胶质母细胞瘤自噬依赖性凋亡。
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