花椒挥发油心血管保护作用的研究

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目的:研究花椒挥发油(The essential oil from Zanthoxvlum bungeanum Maxim,EOZ)在心血管系统的保护作用及作用机制。方法:制备Wistar大鼠胸主动脉环,采用离体血管实验方法,观察EOZ对去氧肾上腺素(PE)和KC1预收缩血管的舒张作用及在血管内皮、平滑肌细胞离子通道(钾通道、钙通道)中的作用机制,经生物信号采集与分析系统测定EOZ对血管环张力的影响并分析其作用机制;Langendorff急性分离大鼠的心肌细胞,激光共聚焦显微镜技术检测EOZ对KC1诱导大鼠心肌细胞钙浓度增加的影响;尾静脉注射EOZ后记录小鼠在常压缺氧条件下的存活时间,衡量常压缺氧条件下小鼠的耐缺氧能力;尾静脉注射EOZ施行冠状动脉左前降支结扎手术诱导大鼠急性心肌缺血实验,心电图检测缺血后大鼠心律的变化情况,24h后取大鼠心脏,采用TTC染色方法检测给药组和空白组大鼠的心肌梗死面积来验证花椒挥发油的心肌保护作用;采用气相色谱-质谱法联用(Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析花椒挥发油中的有效成分。结果:1,花椒挥发油能够浓度依赖性的降低PE(10-6mmol/L)及KC1(60mmol/L)预收缩引起的主动脉环张力,最大舒张幅度可达到100%,在预先孵育了L-NAME、吲哚美辛、阿托品、格列苯脲、4-氨基吡啶、TEA、BaCl2之后,EOZ的舒张作用没有明显变化,提示其舒张作用不是通过内皮和钾通道来发生的;在孵育EOZ之后加入PE,血管的收缩被抑制(p<0.05);此外EOZ还能抑制KC1引起外钙内流导致的血管收缩(p<0.05),说明EOZ的血管舒张作用与抑制钙通道有关;2,花椒挥发油能够浓度依赖性的抑制langendorff急性分离得到的心肌细胞中钙离子浓度的升高,且作用效果与维拉帕米相比没有显著性差异(p>0.05),说明EOZ可能具有心肌保护作用;3,花椒挥发油能够提高小鼠常压耐缺氧的能力,给药组小鼠缺氧时存活时间分别延长4min、8min和15min(p<0.05);提示EOZ对缺氧的心肌具有保护作用;4,尾静脉注射花椒挥发油各剂量组与模型对照组比较,心电图检测表明对照组出现明显的缺血典型的心电图,VPB的首发时间和发生频数各组均有推迟和减少(p<0.05);(0.15mL/100g、0.2mL/100g)组发生VT和VF的数量和持续时间都有所增加(p<0.05,P<0.01.),TTC染色实验显示给药组(0.1mL/100g、0.15mL/100g、0.2mL/100g)与模型对照组比较,大鼠心肌梗死面积分别缩小2.32%(p>0.05)、10.14%和16.37%(p<0.05),提示EOZ对缺血心肌具有保护作用;5,经过鉴别,挥发油中共有58种成分,共有42种萜烯烃(其中27种是单萜类,15种是三萜类),4种芳香族化合物。在它们当中含量最多的是3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇(54.8%),其次是B-水芹烯(14.7%)和D-柠檬烯(10.89%)。结论:花椒挥发油具有心血管系统的保护作用,这种保护作用主要是通过抑制细胞内钙浓度升高来实现的。
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