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本研究分为二部分： 第一部分：氢气及 PI3K/AKt/FOXO3a信号通路在高氧致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡中的作用及机制 目的:探讨氢气在高氧致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡中的作用及潜在机制。 方法:将原代分离培养的肺泡二型上皮细胞随机分为4组，空气对照组、高氧组、高氧组+氢气组、高氧+氢气+LY294002组（PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂），高氧+氢气组在高氧暴露前加入氢气（将氢气溶解在完全培养基中制作成富氢培养基）；高氧+氢气+ LY294002组在高氧暴露前同时加入氢气和 PI3K/Akt特异性抑制剂 LY294002。空气组置于氧体积分数为21%的细胞培养箱中继续培养，其余各组置于氧体积分数为95%密闭氧仓后放入细胞培养箱，各组干预24h后，采用MTS法检测各组细胞增殖情况；流式细胞术检测各组细胞凋亡和细胞周期；Western blot法检测P-Akt、P-FoxO3a、Foxo3a、Akt、Bim、Bax、cyclinD1和 Bcl-2蛋白表达差异；实时荧光定量 PCR检测Foxo3a、Bax、Caspase3和 Bcl-2 mRNA表达差异。 结果:与空气组比较，高氧组P-Akt，P-FoxO3a，cyclinD1和 Bcl-2蛋白表达量降低、而 Bim，Bax和 Foxo3a蛋白表达量则明显增加， Foxo3a、Bax、Caspase3 mRNA表达明显增加、而 Bcl-2 mRNA表达则降低((P<0.01)，最终导致AECII增殖受限、凋亡率明显增加、细胞存活减少；当加入氢气干预后，P-Akt, P-FoxO3a, cyclinD1和 Bcl-2蛋白表达量有所增加、而Bim、Bax和 Foxo3a蛋白表达量则降低，Foxo3a、Bax、Caspase3 mRNA表达降低、而Bcl-2 mRNA表达则增加(P＜0.05)， AECII增殖、凋亡、存活得到改善；此外，氢气的这种保护作用能够被PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂LY29400所阻滞(P<0.01)。 结论:氢气可能通过激活PI3K/Akt/Foxo3a信号通路，抑制凋亡相关蛋白表达、促进抗凋亡蛋白表达，对高氧导致的 AECⅡ凋亡发挥着保护作用。 第二部分：氢气及MAPK-ERK1/2信号通路在高氧致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用及机制 目的:探讨氢气对高氧处理下早产大鼠肺泡II型上皮细胞损伤的保护作用是否与MAPK-ERK1/2信号通路有关。 方法:将原代分离培养的早产鼠AECⅡ分为4组，空气组(氧浓度为21%)、高氧组(氧浓度为95%)、高氧+氢气组、高氧+氢气+PD98059组（ERK1/2信号通路特异性抑制剂）。各组干预24 h后，CCK-8法检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bax蛋白水平；荧光定量PCR检测Bax和 caspase-3 mRNA水平。 结果:高氧处理细胞24h后，细胞增殖受限明显、凋亡率显著增加， p-ERK1/2蛋白水平明显降低，Bax蛋白及Bax、caspase-3mRNA水平均明显升高(P<0.01)；而高氧处理前给予氢气干预后，细胞增殖能力增强、凋亡率有所减低， p-ERK1/2蛋白质水平升高，Bax蛋白及Bax、caspase-3 mRNA水平均降低(P＜0.05)；当加入 ERK1/2抑制剂PD98059后，氢气的保护作用被消除(P＜0.05)。 结论:氢气可能通过激活 MAPK-ERK1/2信号通路抑制凋亡相关基因的表达，改善高氧导致AECⅡ的凋亡和增殖受限，促进细胞存活。