球虫是绵羊和山羊均易感染的常见寄生虫之一。羔羊感染艾美尔球虫后,临床表现通常为食欲不振、消瘦、贫血、腹泻(粪便中有血液、黏膜脱落)、脱水,甚至死亡。育肥羊和成年羊多为亚临床感染,虽然其因感染球虫而死亡的病例非常罕见,但可散播病原并导致羊生长发育迟缓和繁殖性能下降,羊肉、羊奶、羊毛(绒)、羊肠衣及皮革的产量和品质均降低,给养羊业造成极大经济损失,严重阻碍绵羊和山羊养殖业的健康发展。肠道菌群是生活在动物肠道内的复杂微生物群落。在肠道屏障功能中发挥着重要作用,包括促进营养物质消化吸收、维持肠道生理功能和调节机体免疫功能。正常状态下动物肠道处于平衡状态,很多因素可以引起肠道菌群的变化,比如年龄、饮食、病原体等。尽管近年来已有许多研究报道了肠道寄生虫感染与菌群之间的联系,但尚未见有关于球虫感染对绵羊肠道菌群影响的报道。本研究应用Illumina Miseq测序技术探究球虫感染对湖羊羔羊肠道菌群的影响,以期为绵羊肠道寄生虫病的防治策略的制定提供参考和理论依据。1登封某羊场不同生长阶段舍饲湖羊肠道寄生虫感染情况调查为了解不同生长阶段舍饲湖羊肠道寄生虫感染情况,应用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法、饱和蔗糖溶液漂浮法和麦克马斯特计数法对不同生长阶段的301份湖羊粪便样品进行显微镜检查。结果显示:寄生虫总感染率为62.13%(187/301)。共检查到5种肠道寄生虫,其中球虫和阿米巴为优势虫种,感染率分别为47.17%(142/301)和24.25%(72/301),其他寄生虫的感染率分别为线虫7.31%(22/301),绦虫2.32%(7/301),螨虫1.99%(6/301)。对哺乳期羔羊、断奶期羔羊、育肥湖羊、围产期母羊、哺乳期母羊和种公羊六个不同生长阶段的调查发现,断奶期羔羊寄生虫感染率最高81.3%(61/75),哺乳期羔羊寄生虫感染率最低24%(12/50)。断奶期羔羊球虫感染率最高76%(57/75),哺乳期羔羊球虫感染率最低为24%(12/50),但感染强度最大,OPG值最高为10240000)。本次调查结果不同年龄舍饲绵羊合理进行寄生虫病防控提了供科学依据。2自然感染球虫对不同生长阶段湖羊肠道菌群的影响为了探究球虫感染对不同生长阶段湖羊肠道菌群的影响,从养殖场筛选50只湖羊,包括哺乳期羔羊、断奶期羔羊、育肥期湖羊、围产期母羊和泌乳期母羊五个生长阶段,每个生长阶段包括球虫感染组和未感染组。应用Illumina Miseq测序技术检测不同生长阶段球虫感染组和未感染组肠道菌群的动态变化。结果:在所有样品中,厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)是两个主要的门。与未感染组相比,球虫感染组厚壁菌门丰度显著增加,拟杆菌门丰度显著降低(P<0.05)。在属水平上,Ruminococcacecae_UCG-005,Christensenellaceae_R-7_group,Bacteroides 和Rikenellaeae_RC9_gut_group 是所有湖羊样本中的四个主要的属。与未感染组相比,球虫感染组的Ruminococcacae_UCG-005和Christensenellaceae R-7_group的相对丰度较高,而Bacteroides的相对丰度较低。球虫感染对幼龄湖羊(包括哺乳期羔羊和断奶期羔羊)的肠道菌群影响较大,引起肠道群落组成的显著改变,Christen.senellaceae_R-7_group和Bifidobacterium丰度显著降低。年龄是影响湖羊肠道菌群的另一个主要因素,不论是球虫感染组还是未感染组,随着年龄的增长,肠道菌群的多样性、丰富性和相似性逐渐增加,并且肠道菌群逐渐发展成为成熟的群落。本试验首次对自然感染球虫对不同生长期湖羊肠道菌群的影响进行了研究,揭示了不同生长期湖羊肠道菌群组成以及球虫感染对肠道菌群的影响,结果提示球虫感染可引起幼龄湖羊肠道菌群紊乱及某些有益菌的减少,为羊球虫感染与羊肠道菌群关系及其相互影响的研究提供了重要参考依据。3人工感染球虫对断奶湖羊羔羊肠道菌群的影响由于临床中绵羊艾美尔球虫感染多为混合感染,为了解混合种球虫感染对湖羊羔羊肠道菌群的影响,本试验采集大量绵羊新鲜粪便样品,应用饱和食盐溶液漂浮法收集1X 107球虫卵囊,孢子化培养并鉴定为10种艾美尔球虫,用此混合球虫卵囊进行人工感染试验。选取9只健康的50日龄断奶湖羊羔羊,饲喂至65日龄时进行球虫感染试验。将羔羊分为三组,P组为球虫感染组,3只羔羊每只灌喂1 × 105个混合孢子化艾美尔球虫卵囊;DP组为地克珠利处理组,3只羔羊每只灌喂1 × 105个混合孢子化艾美尔球虫卵囊后,第12天给予地克珠利驱虫;C组为对照组,3只羔羊灌喂等量PBS。每两天采集粪便样品记录球虫卵囊排出情况,感染后第0、7、14、21和28天称重,直肠采集粪便样品用于检测肠道菌群。结果:(1)羔羊在球虫感染后第7天观察到球虫卵囊排出,第14天达到球虫卵囊排出高峰期,随后卵囊排出量逐渐降低;感染后第14天羔羊体重减轻最为严重,随后逐渐恢复。地克珠利组于给药两天后球虫卵囊排出量趋于0,与感染未用药组相比,地克珠利组羔羊体重和食欲状态恢复更快。(2)球虫感染降低了羔羊肠道菌群的丰富度和多样性,并引起了肠道菌群的紊乱与菌群组成分布不均。与对照组相比,球虫感染组改变了羔羊肠道群落的组成,在门水平,球虫感染组的厚壁菌门和变形菌门丰度增加,而拟杆菌门丰度降低;在属水平,5-7N15和Oscillospira丰度降低,而Clostridium丰度增加。与感染组相比,地克珠利处理显著降低了羔羊肠道丰富度和多样性,引起了羔羊肠道菌群的紊乱。地克珠利处理后5-7N15和Oscillospira丰度降低,而Bacteroides、Biberstein ia和Clostridium丰度增高。与球虫感染组相比,地克珠利处理加快了球虫感染后羔羊肠道群落稳态的恢复。本研究探明了羔羊人工感染混合种艾美尔球虫后的临床症状、增重变化和排卵囊规律,揭示了人工感染球虫后羔羊肠道菌群的变化,以及地克珠利处理对羔羊临床症状、排卵囊规律及肠道菌群的影响,为羊球虫病的防控及球虫与肠道菌群关系研究提供了理论依据。