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目的
藤茶是我国土家族、苗族、瑶族、拉祜族、侗族等少数民族及客家地区传统的药茶，具有清热解毒、疏散风寒、利湿退黄等功效，主要用于治疗咽喉肿痛、风热感冒、湿热黄疸、疮痈肿痛等病症。近年来，随着民族药材再度成为人们关注的热点，藤茶的保健和药用价值不断被挖掘，越来越多的藤茶相关的制剂被开发和应用。俗话说，“药材好，药才好”，说明药材的质量与中药制剂安全性和有效性密切相关。但目前，藤茶仅收录于《福建省中药材标准(2006版)》、《湖南省中药材标准(2009版)》、《广西壮族自治区壮药质量标准(第一卷)》三个地方药材标准，尚未建立国家统一的药材标准，且相关的质量控制方法研究和报道较少，不能满足药材监管的要求，导致市场上售卖的藤茶来源品种及产地等难以追踪，商品药材质量参差不齐，藤茶制剂研发应用推进困难。为了应对上述出现的问题，本研究遵循国家食药监总局注册司专项“特色民族药材检验方法示范性研究”二期指导原则，参考国家药典、港标、各地省标等示范性标准的先进研究思路，遵循民族医药理论体系，结合传统中医药经验和现代科学技术手段，前往湖北、湖南、广西等9个省份20余个市县采集或收集了大量藤茶样品以及其同属常用的其它8种植物药样品，对藤茶进行本草考证、品种调研、生药鉴别(基原、性状、显微鉴别)、化学鉴别(薄层鉴别、特征图谱鉴别)、分子生物学鉴别、含量测定、常规检查项和残留检测(水分、灰分、浸出物及有害元素和重金属、农药残留)等项目进行了系统深入的研究。通过实地调研我们发现，藤茶深加工研发基础薄弱，利用形式单调，且在加工过程中产生的碎末较多，造成了极大的资源浪费。为了更好的开发应用藤茶，避免加工过程中产生的资源浪费，改良藤茶口感，满足消费者对安全卫生、快速便捷等日常服用的要求，本实验选择袋泡茶型，并对藤茶袋泡茶工艺制备条件进行了的考察和确认。本文旨在建立藤茶药材专属性鉴别方法，对其质量标准和检验方法进行提高和完善，为后期藤茶制剂研发应用奠定基础。研究方法及结果
(1)品种考证及资源调查
查阅历代本草专著或民族药文献(古籍医典)，系统考证藤茶的基原品种、药用功效、性味归经及方法用量、采收加工等。确定目前市场使用的藤茶药材基原为葡萄科植物显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata (Handel-Mazzetti)W. T. Wang)，入药部位为干燥嫩茎叶。采收时间为4到10月份，具体时间可根据各地物候情况灵活调整。加工方式可分为手工和机械加工，制茶核心为采摘、日光凋萎、炒青、揉捻、渥堆、干燥等步骤。
制定藤茶资源和商品药材实地调研路线，实地调查和记录藤茶资源的分布、生长环境、种群特征以及藤茶药材的栽培规模、商品产业状况。并采集或收集藤茶以及其同属常用的其它8种植物药样品。
(2)生药学鉴别
对采集或收集的基原与产地明确、具有代表性的藤茶其同属常用的其它8种植物样品进行拍摄和标本制作，结合文献和标本库，进行初步的基原植物形态鉴别研究，并总结植物鉴别检索表。
应用性状和显微鉴定法和对藤茶药材的外观、颜色、质地、一般内部结构(包括断面特征)、气味、味道等“宏观”特征以及药材的茎横切面、叶横切面、粉末等“微观”结构特征进行观察、分析与描述。并与同属多种植物药材进行比较，发现蛇葡萄属植物卷须、叶片性状和叶横切面显微结构差异较大，可达到鉴别的目的，因此拟将叶片和叶横切面作为藤茶的性状和显微鉴别点。
(3)化学鉴别
参考《湖南省中药材标准(2009版)》中显齿蛇葡萄品种薄层方法，增加二氢杨梅素对照品，改用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:3)为展开剂，并与同属易混淆的广东蛇葡萄和大叶蛇葡萄进行同板比较实验。结果显示藤茶色谱中二氢杨梅素和杨梅苷成分能被识别，斑点清晰不扩散，且可与其同属易混淆植物的斑点进行明显的区分，具有专属性。
用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，根据藤茶所含化学成分的性质，建立其专属性的特征图谱测定方法。共检出5个共有峰，通过对照品比对法指认出二氢杨梅素、花旗松素、杨梅苷和杨梅素4个共有峰。另发现一个未知峰，对其特征进行了初步的研究，还需进一步解析。采用国家药典委员会推荐的《中药指纹图谱相似度评价软件》获取对照特征图谱，并对不同产地、不同加工方法和不同采收部位的56批藤茶药材进行相似度比较，发现相似度无明显差异。(4)含量测定
利用峰面积归一化法计算特征图谱中各共有峰成分含量，发现二氢杨梅素占有绝对高的含量。故本实验选择二氢杨梅素为藤茶的专属性指标成分，采用HPLC测定69批藤茶样品中二氢杨梅素含量，结果显示藤茶中二氢杨梅素含量为13.41%～45.32%，平均值为25.04%。。
(5)分子生物学鉴定
参照"中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则"对藤茶及其同属8种药用植物的ITS2、matK、psbA-trnH、ITS基因序列信息进行分析。结果显示蛇葡萄属植物对ITS和matK序列PCR扩增效果较差，ITS2和psbA-trnH序列对蛇葡萄属物种的鉴定效率较差。
利用一种简化基因组测序技术(Genotyping-by-Sequencing，GBS)，筛选得到蛇葡萄属特异性单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)位点，结果分析发现可根据SNP位点的基因型，分别挑选序列设计引物来组合鉴定蛇葡萄属物种。(5)检查项目
参照2015《中国药典》四部中对56批藤茶药材常规检查项(水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物)进行测定和分析。根据测定结果建议藤茶药材中水分含量不应过10%、总灰分含量不应过7.0%，酸不溶性灰分不应过1%。醇溶性浸出物不得低于18%。
采用电感耦合等离子体质谱法(InductivelyCoupledPlasmamassspectrometry，
ICP-MS)同时测定45批藤茶样品中铅、铬、砷、铜、汞五个有害重金属元素含量并进行风险评估。建议为保证用药的安全性，应加强藤茶药材的镉和铅的含量控制。
采用气相色谱-串联质谱法(Gas Chromatography-tandem Mass SpectrometryGC-MS/MS)快速筛查56批藤茶样品中53种农药残留，结果部分批次检测出哒螨酮、喹螨醚和苯醚甲环唑残留，但均未超过标准规定的最大残留限度。
(6)袋泡茶工艺研究
以感官评价、二氢杨梅素含量等指标作为考核，考察筛选出袋泡茶中藤茶粒径、浸泡时间、加水量以及冲泡次数，最终得到了茶汤棕黄，清澈透明，口感甘甜，且水分、总灰分和水浸出率等各指标符合“GB/T24690-2009袋泡茶”标准的藤茶袋泡茶。
结论
本研究实现了对藤茶本草的考证、主产区的资源调查和样品收集，解决了民族药材标准提高的重点和难点，即正本清源的问题，为藤茶系统的研究奠定理论和样品基础；结合传统经验和现代技术手段，建立了藤茶药材专属性鉴别方法，为中药鉴定的传承与创新提供参考；按国家和地方标准，对藤茶质量标准和检验方法进行提高和完善，为藤茶的质量标准制定提供方法和数据；初步确定了藤茶袋泡茶工艺参数和指标，为其制剂的开发和临床的应用奠定基础。
藤茶是我国土家族、苗族、瑶族、拉祜族、侗族等少数民族及客家地区传统的药茶，具有清热解毒、疏散风寒、利湿退黄等功效，主要用于治疗咽喉肿痛、风热感冒、湿热黄疸、疮痈肿痛等病症。近年来，随着民族药材再度成为人们关注的热点，藤茶的保健和药用价值不断被挖掘，越来越多的藤茶相关的制剂被开发和应用。俗话说，“药材好，药才好”，说明药材的质量与中药制剂安全性和有效性密切相关。但目前，藤茶仅收录于《福建省中药材标准(2006版)》、《湖南省中药材标准(2009版)》、《广西壮族自治区壮药质量标准(第一卷)》三个地方药材标准，尚未建立国家统一的药材标准，且相关的质量控制方法研究和报道较少，不能满足药材监管的要求，导致市场上售卖的藤茶来源品种及产地等难以追踪，商品药材质量参差不齐，藤茶制剂研发应用推进困难。为了应对上述出现的问题，本研究遵循国家食药监总局注册司专项“特色民族药材检验方法示范性研究”二期指导原则，参考国家药典、港标、各地省标等示范性标准的先进研究思路，遵循民族医药理论体系，结合传统中医药经验和现代科学技术手段，前往湖北、湖南、广西等9个省份20余个市县采集或收集了大量藤茶样品以及其同属常用的其它8种植物药样品，对藤茶进行本草考证、品种调研、生药鉴别(基原、性状、显微鉴别)、化学鉴别(薄层鉴别、特征图谱鉴别)、分子生物学鉴别、含量测定、常规检查项和残留检测(水分、灰分、浸出物及有害元素和重金属、农药残留)等项目进行了系统深入的研究。通过实地调研我们发现，藤茶深加工研发基础薄弱，利用形式单调，且在加工过程中产生的碎末较多，造成了极大的资源浪费。为了更好的开发应用藤茶，避免加工过程中产生的资源浪费，改良藤茶口感，满足消费者对安全卫生、快速便捷等日常服用的要求，本实验选择袋泡茶型，并对藤茶袋泡茶工艺制备条件进行了的考察和确认。本文旨在建立藤茶药材专属性鉴别方法，对其质量标准和检验方法进行提高和完善，为后期藤茶制剂研发应用奠定基础。研究方法及结果
(1)品种考证及资源调查
查阅历代本草专著或民族药文献(古籍医典)，系统考证藤茶的基原品种、药用功效、性味归经及方法用量、采收加工等。确定目前市场使用的藤茶药材基原为葡萄科植物显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata (Handel-Mazzetti)W. T. Wang)，入药部位为干燥嫩茎叶。采收时间为4到10月份，具体时间可根据各地物候情况灵活调整。加工方式可分为手工和机械加工，制茶核心为采摘、日光凋萎、炒青、揉捻、渥堆、干燥等步骤。
制定藤茶资源和商品药材实地调研路线，实地调查和记录藤茶资源的分布、生长环境、种群特征以及藤茶药材的栽培规模、商品产业状况。并采集或收集藤茶以及其同属常用的其它8种植物药样品。
(2)生药学鉴别
对采集或收集的基原与产地明确、具有代表性的藤茶其同属常用的其它8种植物样品进行拍摄和标本制作，结合文献和标本库，进行初步的基原植物形态鉴别研究，并总结植物鉴别检索表。
应用性状和显微鉴定法和对藤茶药材的外观、颜色、质地、一般内部结构(包括断面特征)、气味、味道等“宏观”特征以及药材的茎横切面、叶横切面、粉末等“微观”结构特征进行观察、分析与描述。并与同属多种植物药材进行比较，发现蛇葡萄属植物卷须、叶片性状和叶横切面显微结构差异较大，可达到鉴别的目的，因此拟将叶片和叶横切面作为藤茶的性状和显微鉴别点。
(3)化学鉴别
参考《湖南省中药材标准(2009版)》中显齿蛇葡萄品种薄层方法，增加二氢杨梅素对照品，改用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:3)为展开剂，并与同属易混淆的广东蛇葡萄和大叶蛇葡萄进行同板比较实验。结果显示藤茶色谱中二氢杨梅素和杨梅苷成分能被识别，斑点清晰不扩散，且可与其同属易混淆植物的斑点进行明显的区分，具有专属性。
用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，根据藤茶所含化学成分的性质，建立其专属性的特征图谱测定方法。共检出5个共有峰，通过对照品比对法指认出二氢杨梅素、花旗松素、杨梅苷和杨梅素4个共有峰。另发现一个未知峰，对其特征进行了初步的研究，还需进一步解析。采用国家药典委员会推荐的《中药指纹图谱相似度评价软件》获取对照特征图谱，并对不同产地、不同加工方法和不同采收部位的56批藤茶药材进行相似度比较，发现相似度无明显差异。(4)含量测定
利用峰面积归一化法计算特征图谱中各共有峰成分含量，发现二氢杨梅素占有绝对高的含量。故本实验选择二氢杨梅素为藤茶的专属性指标成分，采用HPLC测定69批藤茶样品中二氢杨梅素含量，结果显示藤茶中二氢杨梅素含量为13.41%～45.32%，平均值为25.04%。。
(5)分子生物学鉴定
参照"中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则"对藤茶及其同属8种药用植物的ITS2、matK、psbA-trnH、ITS基因序列信息进行分析。结果显示蛇葡萄属植物对ITS和matK序列PCR扩增效果较差，ITS2和psbA-trnH序列对蛇葡萄属物种的鉴定效率较差。
利用一种简化基因组测序技术(Genotyping-by-Sequencing，GBS)，筛选得到蛇葡萄属特异性单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)位点，结果分析发现可根据SNP位点的基因型，分别挑选序列设计引物来组合鉴定蛇葡萄属物种。(5)检查项目
参照2015《中国药典》四部中对56批藤茶药材常规检查项(水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物)进行测定和分析。根据测定结果建议藤茶药材中水分含量不应过10%、总灰分含量不应过7.0%，酸不溶性灰分不应过1%。醇溶性浸出物不得低于18%。
采用电感耦合等离子体质谱法(InductivelyCoupledPlasmamassspectrometry，
ICP-MS)同时测定45批藤茶样品中铅、铬、砷、铜、汞五个有害重金属元素含量并进行风险评估。建议为保证用药的安全性，应加强藤茶药材的镉和铅的含量控制。
采用气相色谱-串联质谱法(Gas Chromatography-tandem Mass SpectrometryGC-MS/MS)快速筛查56批藤茶样品中53种农药残留，结果部分批次检测出哒螨酮、喹螨醚和苯醚甲环唑残留，但均未超过标准规定的最大残留限度。
(6)袋泡茶工艺研究
以感官评价、二氢杨梅素含量等指标作为考核，考察筛选出袋泡茶中藤茶粒径、浸泡时间、加水量以及冲泡次数，最终得到了茶汤棕黄，清澈透明，口感甘甜，且水分、总灰分和水浸出率等各指标符合“GB/T24690-2009袋泡茶”标准的藤茶袋泡茶。
结论
本研究实现了对藤茶本草的考证、主产区的资源调查和样品收集，解决了民族药材标准提高的重点和难点，即正本清源的问题，为藤茶系统的研究奠定理论和样品基础；结合传统经验和现代技术手段，建立了藤茶药材专属性鉴别方法，为中药鉴定的传承与创新提供参考；按国家和地方标准，对藤茶质量标准和检验方法进行提高和完善，为藤茶的质量标准制定提供方法和数据；初步确定了藤茶袋泡茶工艺参数和指标，为其制剂的开发和临床的应用奠定基础。