白花前胡抽薹前后香豆素含量变化及PAL基因的功能分析

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目的:中药前胡基源植物为伞形科植物白花前胡,种植白花前胡的过程中易发生“早薹”现象,抽薹后香豆素成分含量骤降,香豆素成分作为次生代谢产物,其含量的变化必然有生物合成途径关键酶基因的调控,故本课题对白花前胡抽薹前后香豆素含量如何变化进行了研究,探究香豆素生物合成途径关键酶基因对香豆素合成的调控是否也受到抽薹的影响。方法:采用高效液相色谱法测定不同生长发育时期白花前胡根、茎及叶中白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡素E、白花前胡香豆精I和白花前胡香豆精II的含量,分析白花前胡香豆素含量在抽薹前后的变化规律;挑选香豆素生物合成途径上的6个关键酶,采用荧光定量PCR技术比较抽薹前后香豆素生物合成途径关键酶基因的表达量变化,并对植物施加盐胁迫,分析关键酶基因在逆境胁迫应答中的响应模式,采用转基因拟南芥对表达量差异最为显著的苯丙氨酸解氨酶PAL在盐胁迫响应过程中的功能进行分析。结果:抽薹前根中香豆素含量较高,茎中最低,叶片中香豆素含量与根近似;而抽薹后根和叶中中香豆素含量无明显变化,茎中香豆素却达到最高;开花后根和茎中的香豆素含量极显著下降,叶中却在上升。特别是白花前胡甲素、白花前胡乙素及白花前胡素E在根、茎和叶中的含量均受到抽薹开花的影响,根中的含量在开花后时期极显著的降低,而抽薹后茎中在极显著增加,开花后白花前胡甲素和白花前胡素E在叶中的含量在极显著的增加。与此相应的是抽薹后茎中关键酶基因相对表达量在极显著的增加,而根和叶中关键酶基因的表达量却与香豆素含量背道而驰。Pp PAL、Pp4CL的表达量在受到盐胁迫后有不同程度的上调表达,对Pp PAL进行功能分析发现它能提高植物的耐盐性。结论:上述研究结果初步揭示了不同生长发育时期白花前胡中的香豆素类成分的合成与积累规律,证实Pp PAL基因在响应植物逆境胁迫中起到重要作用,为进一步研究白花前胡香豆素生物合成及逆境响应的调控机制提供了思路。
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