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水痘是由水痘带状疱疹病毒(Varicella-Zoster Virus, VZV)引起的一种疾病,主要见于儿童,传染性极强,并且会出现多种并发症。感染水痘后潜伏于感觉神经中枢的病毒再活化会引起带状疱疹。针对水痘和带状疱疹,目前没有有效的治疗方法,而疫苗可以有效地预防这两种疾病。随着水痘疫苗接种量的增加,就迫切需要一种高灵敏度、高特异性、操作快速简单的方法对其免疫效果做出全面评价。但已建立的检测水痘特异性抗体的方法均存在各种缺点,而且多半是定性或半定量的。此外,在清除病毒、预防带状疱疹时起重要作用的细胞介导免疫应答,还没有被用于水痘疫苗免疫效果的评价。本课题主要通过纯化VZV的糖蛋白建立检测血清中抗VZV IgG抗体的糖蛋白酶联免疫吸附法(gp-ELISA),及通过免疫小鼠建立检测细胞介导免疫应答的酶联免疫斑点技术(ELISPOT),再用建立的两种方法比较水痘减毒活疫苗与灭活疫苗的免疫效果。VZV感染细胞后,用小扁豆凝集素亲和层析纯化得到病毒的糖蛋白,以该糖蛋白为抗原包被酶标板,通过优化抗原包被浓度；封闭液的成分；一抗、酶标抗体稀释液的成分；一抗、酶标抗体反应时间；酶标抗体工作浓度；底物显色时间初步建立了gp-ELISA方法。再使用VZV IgG标准品建立了定量gp-ELISA检测方法的标准曲线,曲线方程为：y=1.2878x+0.1481,r2=0.9938,定量限为：1.86mIU/mL, cutoff值为：6.13mIU/mL。同时检测153份儿童血清得出,建立的gp-ELISA方法与膜抗原荧光抗体法(FAMA)相比,阴性检出率为95.8%；阳性检出率为：77.6%。而且,该方法具有良好的特异性、稳定性和精密度。同时以水痘减毒活疫苗和相同方法制备的MRC-5细胞成分免疫小鼠,2周后分离小鼠脾淋巴细胞,用建立ELISPOT方法检测VZV特异性IL-2及IFN-γ分泌细胞的应答。实验确定出ELISPOT方法中的细胞浓度为：1×106个/孔、疫苗的免疫剂量为：3750PFU、刺激物浓度为：VZV-gp 100μg/mL、Cell-gp 50μg/mL。小鼠分别免疫水痘减毒活疫苗和灭活疫苗后2、3、4周,通过ELISPOT方法检测IL-2及IFN-γ分泌细胞的应答,发现两种疫苗均诱导产生VZV特异性细胞介导免疫应答,并且没有显著性差异；用gp-ELISA方法测得,免疫后3周内两种疫苗诱导产生的抗VZV IgG抗体水平也没有显著性差异,但第4周时水痘减毒活疫苗诱导产生的抗体水平明显高于灭活疫苗。本研究成功地建立了定量检测血清中抗VZV IgG抗体的gp-ELISA,及检测水痘疫苗诱导产生细胞介导免疫应答的ELISPOT方法,二者具有高度的灵敏度和特异性,为全面评价水痘疫苗的免疫效果奠定了基础。