血友病B是一种由于人凝血因子Ⅸ缺陷导致的遗传性严重出血性疾病，临床治厅主要依靠输血或凝血酶原复合物，常规治疗暂时有效，需经常输注，而且容易感染AIDS及肝炎病毒，因此，人们设想用反转录病毒介导的基因治疗来替代目前的常规治疗方法从根本上治疗血友病B。 本项研究先后构建了带有人FLX cDNA由不同病毒启动子控制转录的反转录病毒载体及重组质粒：LIXSN(LN系列，LTR启动子控制FLX cDNA转录)：LNCIX(LN系列，CMV启动子控制FIX cDNA转录)，LCIXSN(LN系列，CMV和LTR启动子共同控制FIX cDNA转录)，GlNaC-IX(GlNa系列，CMV启动子控制FIX cDNA转录)，GlNaC-I-IX(GlNa系列，含IL-2基因内含子，CMV启动子控制FIX cDNA转录)，GlNaC-I′-IX(GlNa系列。含FIX基因自身内含子，CMV启动子控制FIXcDNA转录)，GlNaC-K-IX(GlNa系列，含Kozak一致顺序，CMV启动子控制FLX cDNA转录)，MFG-IX(MFG框架，不含选择基因，LTR控制FLX cDNA转录)，MP6-IX(MP6框架，含IL-2内含子，CMV启动子控制FIX cDNA转录)，将病毒载体及重组质粒基因转移PA317病毒包装细胞，人纤维肉瘤细胞HT1080，小鼠、大鼠、兔和血友病B患者皮肤成纤维细胞、小鼠和人成肌细胞，小鼠和人骨髓细胞，血友病B患者骨髓基质细胞等一系列不同靶细胞，获得了高效转移和表达，并研究了FLX cDNA离体表达的多种因素，包括双启动子，选择基因，G418，克隆筛选等，将表达人FIX的兔皮肤或纤维细胞用胶原包埋、进行兔皮下或腹腔移植，人FIX cDNA在兔体内表达水平最高达500ng／ml血浆，持续表达最久达700天，探索了细胞密度与人FIX表达的关系；建立了有关基因转移和治疗的安全性检测系统，灵敏而准确地检测了具有复制能力的反转录病毒(RCR)，恶性转化细胞以及其他基因治疗质控要点要求项目。率先对两例血友病B患者进行了世界首次血友病B基因治疗的临床Ⅰ期试验，先后有四名血友病B患者接受了基因治疗，患者经治疗后体内FIX浓变上升，出血症状减轻，治疗效果持续，无任何治疗相关毒副作用及病理改变，取得了安全有效的结果。