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目的:本实验探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对胆碱缺乏的氨基酸(choline-deficient L-amino acid-defined,CDAA)饲料诱导的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝纤维化进程及TLR-4/NF-κB信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠36只,6周龄,体质量140-150g,适应喂养1周。将大鼠随机分成2组,18只大鼠予以含胆碱的氨基酸(choline-supplemented L-amino acid-defined,CSAA)饲料喂养为对照组,18 只大鼠予以胆碱缺乏的氨基酸(choline-deficient L-amino acid-defined,CDAA)饲料喂养为模型组。第4周末两组分别随机取6只大鼠处死,留取肝右叶,用做病理检查,证实非酒精性脂肪性肝病大鼠造模成功。剩余24只大鼠在原有分组基础上继续分组,每日分别予以腹腔注射生理盐水(normal saline,NS)或LPS(0.25mg/Kg),即 CSAA 饲料+腹腔注射 NS(0.25mg/Kg)组 6 只,CSAA 饲料+腹腔注射LPS(0.25mg/Kg)组6只,CDAA饲料+腹腔注射NS(0.25mg/Kg)组6只和CDAA饲料+腹腔注射LPS(0.25mg/Kg)组6只,继续喂养6周。第10周末结束全部实验,乙醚麻醉下称体质量;腹主动脉采血并分离血清,生化法测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG);ELISA双抗体夹心法测定血清LPS结合蛋白(lipopoly saccharide binding protein,LBP),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量;留取部分肝右叶,行HE染色法观察肝脏组织病理改变;天狼猩红染色和α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫组化法明确大鼠肝脏组织纤维化的程度;采用PCR芯片(PCR-Array)技术检测LPS-TLR4信号通路相关基因的表达情况,进一步探讨LPS对NAFLD大鼠肝纤维化进程及TLR-4/NF-κB信号通路的影响。结果:1.第四周末,HE染色示CDAA组大鼠肝组织有明显的脂肪变。第十周末HE染色示,CSAA+LPS组大鼠肝脏结构大致正常,可见局部少量炎细胞浸润;CDAA+LPS组和CDAA+NS组大鼠肝组织可见明显的脂肪变性、肝小叶结构紊乱及炎细胞浸润,但CDAA+LPS组更为明显。2CDAA+LPS组与其他各组相比较,体重减轻(P<0.01),肝重增加(P<0.01),肝脏指数增加(P<0.01)。3.CDAA+LPS组大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)含量均高于与其他各组,有统计学差异(P<0.01)。4.CDAA+LPS组大鼠与其他各组大鼠比较血清中IL-6、TNF-α和LBP含量升高,有明显统计学差异(P<0.01)。5.天狼猩红染色和α-SMA免疫组化结果示CDAA+LPS组较其他各组大鼠肝组织中血管周围纤维化面积百分比增加,差异有明显统计学意义(P<0.01)。6.PCRArray 结果提示:CSAA+LPS 组、CDAA+LPS 组分别与 CDAA+NS组比较共同上调或下调≥ 2倍的基因表达,即腹腔注射LPS后大鼠肝脏组织共同高表达TLR-4;炎症因子:IL-6、TNF-α、ILIb;炎症细胞趋化因子:Ccl2、Cxc10;细胞凋亡相关因子:Fadd、Rela、Ripk2;MAPK信号通路的相关基因:Map3k1、Map4k1;启动和调节NF-κB通路基因表达:Nfkb1、Nfkb2;肿瘤及癌症形成的促进基因Ptgs2;干扰素因子lrf1。共同低表达抗炎因子:Ifnb1、IL2;粒细胞集落刺激因子:Csf3。结论:1.LPS促进CDAA饲料诱导的NAFLD大鼠肝组织纤维化;2.LPS可通过与TLR-4结合,激活NF κB、MAPK信号通路,促进炎症因子的基因表达上调,表达和释放多种炎症因子,加速并扩大炎症反应,激活肝脏库普弗细胞(Kupffer cell,KC)及肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),促进肝纤维化。