【摘 要】
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金龟子绿僵菌是一类广泛应用的虫生真菌,在昆虫防治中起着重要作用。本实验采用水解圈法和摇瓶筛选的方法从32株虫生真菌中筛选出高产酯酶的菌株为金龟子绿僵菌Ma-3。以Ma-3
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金龟子绿僵菌是一类广泛应用的虫生真菌,在昆虫防治中起着重要作用。本实验采用水解圈法和摇瓶筛选的方法从32株虫生真菌中筛选出高产酯酶的菌株为金龟子绿僵菌Ma-3。以Ma-3为材料,采用单因素筛选法来研究营养因素对产酶量的影响,结果表明D-山梨醇、酵母粉、Ba2+和VB4最适合该菌产酯酶。通过对碳源、氮源、维生素、金属离子和pH进行正交设计和响应面法优化获得该菌最佳产酯酶培养基:21.40g/L的D-山梨醇,11.45g/L酵母粉,Ba2+的浓度为2.60g/L,1 g/L VB4,pH6.9;最佳培养条件:接种量 25 mL,装液量 125 mL/250 mL,菌龄4 d,培养时间54 h。绿僵菌Ma-3在优化培养基及培养条件下的酯酶活性高达46.19 U/mL,酶活提高了 2.4倍。经硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶层析,获得较纯化的酯酶;经SDS-PAGE电泳验证表明其蛋白分子质量分别为40KDa,45 KDa和49 KDa。对其酶学性质进行研究,结果表明该酯酶的最适反应温度为50 ℃,在低于50℃时稳定性较好,最适pH为7.0,在pH6-9时稳定性较好,Mg2+、Ca2+和丙酮等能促进该酶的活性,而Al3+、Mn2+和氯仿等抑制该酶的活性。该酯酶的 Km 值为 0.875 mg/mL,Vmax 为 208.33 μmol/min。
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