病毒性传染病目前在全球范围内呈大流行趋势,严重威胁公共卫生安全和社会的经济发展。接种疫苗是控制、预防传染病最有效的手段之一。佐剂在疫苗的使用中发挥着十分重要的作用。目前常用的佐剂主要以铝佐剂、油乳佐剂为主。其中铝佐剂可以诱导机体产生体液免疫应答,但也会导致一定的不良反应,如肿胀、发热等。因此,需要开发一种安全、有效的佐剂用于增强抗原的免疫应答效果。本研究使用DSPE-PEG-Man与chol-Cp G共修饰的RBCm包被PLGA纳米颗粒,构建了具有脾脏DC靶向作用的CMR-PLGA纳米佐剂。皮下注射后,基于RBCm的脾靶向作用、甘露糖和MR之间的靶向作用,将抗原靶向递送至脾脏的DC,提高DC对抗原的摄取,从而促进抗原呈递,DC成熟,T细胞活化和B细胞成熟,提高抗原特异性抗体的效价,实现了增强体液和细胞免疫的目的。具体研究内容如下所示:1.构建CMR-PLGA纳米佐剂,并对其进行表征。首先,使用复乳法构建CMR-PLGA纳米佐剂。SDS-PAGE图像表明RBCm包被在纳米佐剂表面。经DLS检测,RBCm包被前粒径为158 nm,Zeta电位为-14.2 m V;RBCm包被后纳米佐剂粒径为173 nm,Zeta电位为-23.3 m V。在PBS与血清中有着良好的稳定性。对抗原的包封率75%,30天的累积释放量为67.4%,起到了缓释作用。并且以冻干粉的形式保存复溶后,粒径无明显变化。2.评估CMR-PLGA纳米佐剂的靶向性。使用荧光标记的纳米佐剂与BMDC共孵育,检测其摄取效果。激光共聚焦图像、流式细胞术与荧光定量结果均表明纳米佐剂显著提高了DC的摄取。小动物活体成像观察到纳米佐剂明显富集于脾脏。表明CMR-PLGA纳米佐剂具有良好的脾脏DC靶向作用。3.体外评估CMR-PLGA纳米佐剂对DC成熟和呈递抗原的影响。CMR-PLGA纳米佐剂可显著促进DC表面MHC、CD80、CD86的表达,和相关细胞因子（TNF-α,IL-12,IFN-γ）的分泌。从而实现有效的刺激DC成熟,促进抗原的呈递。4.纳米佐剂体内免疫效果评价。选用ASFV p54蛋白为抗原,弗氏佐剂为阳性对照。对小鼠进行免疫接种后,CMR-PLGA纳米佐剂可有效刺激脾脏中DC的成熟,T细胞的活化,B细胞的成熟,诱导产生了高滴度的p54特异性抗体,并且表现出良好的生物安全性。本文成功构建一种具有脾脏靶向作用的纳米佐剂（CMR-PLGA）,具有良好的稳定性和生物相容性。可以诱导机体产生较高水平的细胞免疫与体液免疫应答,是一种具有潜力的安全、高效的新型佐剂。本研究为动物疫苗佐剂的研究提供了新的试验基础和思路。