人胰岛素原乳腺特异表达转基因细胞和转基因小鼠模型的制备

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利用非胰岛β细胞生产胰岛素一直生物合成胰岛素研究领域的热点,胰岛素原在胰岛β细胞中主要通过PC1/3,PC2和CPH三种酶加工成有活性的胰岛素。研究发现,PC1/3酶在哺乳动物乳腺细胞中广泛表达。  本研究合成了两条经过修饰得人胰岛素原基因,Seq-662、Seq-792,以及未经过修饰的胰岛素原基因,Seq-663。构建乳腺特异表达载体662-PBC-1、663-PBC-1、792-PBC-1。利用人乳腺癌细胞系,BCAP-37制备转基因细胞,分离单细胞来源细胞65株,其中携带外源基因的细胞23株。选取其中的662-B4、663-4和792-F三株进行诱导、刺激人胰岛素原基因的表达显示,在相同诱导时间内,不同转基因细胞中人胰岛素原基因的表达,随着葡萄糖刺激浓度的不断增加,但是不同细胞对于葡萄糖的反应存在不同。综上所述,本研究构建了2个修饰的人胰岛素原乳腺表达载体,并且检测发现,他们能够在细胞和个体水平很好的诱导表达人胰岛素原基因。这将为今后在大动物乳腺中生产人胰岛素提供理论基础。
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