【摘 要】
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目的:采用外泌体测序技术,探讨阳化汤对急性缺血性中风（Acute Ischemic Stroke,AIS）血清外泌体miRNA的调控机制。方法:本研究共纳入AIS患者16例和健康受试者8例。将AIS患者随机分为治疗组、对照组各8例,治疗组在对照组基础上加用阳化汤治疗,观察周期为7天。健康受试者在入组0天时采集血清样本,AIS患者在第7天采集血清样本,分离并鉴定外泌体。采用small RNA测序技术
【基金项目】
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广西区科技厅重点研发计划（项目编号:桂科AB18221020）；
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目的:采用外泌体测序技术,探讨阳化汤对急性缺血性中风（Acute Ischemic Stroke,AIS）血清外泌体miRNA的调控机制。方法:本研究共纳入AIS患者16例和健康受试者8例。将AIS患者随机分为治疗组、对照组各8例,治疗组在对照组基础上加用阳化汤治疗,观察周期为7天。健康受试者在入组0天时采集血清样本,AIS患者在第7天采集血清样本,分离并鉴定外泌体。采用small RNA测序技术对外泌体中的miRNA进行测序,筛选出经阳化汤治疗后具有差异表达的外泌体miRNA。使用TargetScan、miRDB和miRWalk预测所筛选出的差异miRNA的靶基因,进一步分析靶基因的功能及相关通路。并在治疗前后分别对AIS患者进行NIHSS量表、ADL量表及中医证候积分评分。探讨阳化汤对AIS患者血清外泌体miRNA的调控机制,以期对AIS的临床研究提供依据。结果:1、血清外泌体miRNA表达的研究结果:（1）与健康受试者相比,治疗组患者血清外泌体中差异表达的miRNA共74个,其中上调表达的28个,下调表达的46个;对照组患者血清差异表达的外泌体miRNA共64个,其中上调表达的21个,下调表达的43个;（2）与对照组相比,治疗组患者血清外泌体中差异表达的miRNA共25个,其中上调表达的12个,下调表达的13个;（3）经过筛选,确定阳化汤调控AIS阳虚证患者血清外泌体miRNA最为显著的3个外泌体miRNA分别为miR-9-3p、miR-9-5p、miR-124-3p。2、血清外泌体miR-9-3p/5p、miR-124-3p的生物信息学分析结果:（1）靶基因预测:共预测3个外泌体miRNA的靶基因475个。（2）靶基因功能富集分析:对3个外泌体miRNA的靶基因的功能分析发现其存在细胞间连接、双细胞紧密连接组件、转录因子活性、RNA聚合酶II转录因子结合等多个生物过程,发挥多种生物功能。（3）靶基因Pathway分析:3个外泌体miRNA靶基因共富集了12条通路,包括cGMP-PKG信号通路、Apelin信号通路、胰岛素信号通路等信号转导途径,以及内分泌抵抗、细胞衰老、胞吞作用等生化代谢途径。3、阳化汤治疗AIS阳虚证患者的疗效分析结果:治疗组与对照组在治疗AIS患者后NIHSS量表、ADL量表及中医证候积分评分均较前改善,且治疗组比对照效果更佳（P<0.05）。结论:阳化汤能改善AIS患者神经功能缺损及提高日常生活能力;阳化汤可能通过下调AIS阳虚证患者血清外泌体miR-9-3p/5p、miR-124-3p的表达,进一步影响cGMP-PKG等信号途径,发挥治疗作用。
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