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目的:探讨逃逸线粒体DNA(mt DNA)介导的Toll样受体9(TLR9)-髓样分化因子88(My D88)信号通路在呼吸机相关性肺损伤(VILI)发生中的作用机制。方法:1.将40只健康雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组、正常潮气量组(VT为8 m L/kg)、大潮气量组(VT为40 m L/kg)和TLR9抑制剂+大潮气量组(腹腔注射ODN2088 500μg/只,VT为40m L/kg),每组10只。正常VT组、大VT组和抑制剂组分别进行机械通气,呼气末正压(PEEP)为0,吸入氧浓度(Fi O2)为0.50。通气4 h后,心脏采血法采集大鼠心脏血并处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-6、IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。然后收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用BCA法测定总蛋白含量。取肺组织,测定肺湿/干重比值(W/D);苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺组织病理学改变;采用免疫组化法和Western Blot(WB)检测肺组织中TLR9、My D88和核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达。2.将40只健康雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组、正常潮气量组(VT为8 m L/kg)、大潮气量组(VT为40 m L/kg)和mt DNA抑制剂+大潮气量组(腹腔注射CQ 30μg/只,VT为40 m L/kg),每组10只。VILI模型建立,以及机械通气结束后检测肺损伤程度,方法同上。采用RT-PCR和WB法检测肺组织中mt DNA编码的细胞色素C氧化酶4(COX-4)、TLR9、My D88和核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的m RNA和蛋白表达。结果:光镜下显示,自主呼吸组和正常VT组大鼠肺组织结构基本正常,而大VT组肺组织则可见明显炎症性改变。与正常VT组和自主呼吸组比较,大VT组大鼠肺W/D比值、BALF中总蛋白含量、血清中炎性因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)含量均明显升高。m RNA和蛋白的检测结果显示,大潮气量组大鼠肺组织中COX-4、TLR9、My D88、NF-κB p65蛋白表达明显升高。TLR9抑制剂ODN2088的使用能明显降低肺组织中TLR9、My D88、NF-κB p65表达量;mt DNA抑制剂CQ的使用能明显降低肺组织中COX-4、TLR9、My D88、NF-κB p65表达量;且两种抑制剂均能减轻大VT通气所致的炎性反应。结论:大VT通气4 h可以导致肺通气性损伤,逃逸mt DNA能被TLR9识别,激活TLR9-My D88信号转导通路,使其下游的NF-κB p65表达上调,介导炎性因子释放,使肺组织发生急性炎症损伤,最终引发VILI。