三角帆蚌是一种淡水育珠贝,是我国的特有种,能够培育出优质的珍珠。影响珍珠价值的原因有很多,而其中颜色是最重要的原因之一,黑色素是影响珍珠颜色形成的关键因素之一。本研究将本实验室选育的紫色和白色两个不同颜色家系的三角帆蚌作为实验材料,从实验室已有的转录组数据库中筛选获得两个与三角帆蚌珍珠层颜色相关的基因:Creb和PKC基因,探索这两个基因在黑色素合成过程以及与三角帆蚌珍珠层颜色之间的关系。1.三角帆蚌环磷酸腺苷反应元件结合蛋白HcCreb基因的克隆与表达分析通过RACE克隆获得HcCreb基因全长,HcCreb全长为1463 bp,其中5’UTR长度为15 bp,3’UTR长度为344 bp,CDS区长度为1104bp,共编码了367个氨基酸。氨基酸序列所对应的成熟蛋白分子量为119.63 k Da,理论等电点为4.83。Creb基因序列号:MT816340。HcCreb在两种颜色的三角帆蚌各组织中均有表达,且在闭壳肌（p＜0.01）和外套膜（p＜0.05）中有显著性差异,其他组织无显著性差异。除鳃组织外,紫色三角帆蚌其他组织的表达水平均高于白色三角帆蚌。在两种颜色的三角帆蚌中都是鳃组织的表达量最高,其次是外套膜。通过原位杂交技术确定了HcCreb基因在外套膜组织中的具体表达位置,原位杂交的主要信号出现在边缘膜处,而在其他位置尚未检测到信号。经过熊果苷处理6h后,2个不同浓度HcTyr,HcMitf,HcCreb基因的表达量与空白组对比出现了显著下降;经过熊果苷处理12h后,2个不同浓度HcTyr,HcMitf,HcCreb基因的表达量与6h相比升高。通过检测黑色素含量发现经过熊果苷处理后的边缘膜中的黑色素含量相比于未经任何处理的空白组出现了显著下降（p＜0.05）。2.三角帆蚌蛋白激酶C HcPKC基因的克隆与其表达分析通过RACE克隆获得HcPKC基因全长。HcPKC全长为2134bp,其中5’UTR长度为12 bp,3’UTR长度为1246bp,ORF区为876bp,共编码了291个氨基酸。氨基酸序列所对应的成熟蛋白分子量为117.04 k Da,理论等电点为4.73。PKC基因序列登陆号:MW241548。通过荧光定量分析发现,HcPKC在紫色三角帆蚌各组织中的表达水平均高于白色三角帆蚌,并在边缘膜组织中有显著差异;在紫色蚌各组织中,边缘膜组织的表达水平最高,有显著性差异;在白色蚌中,表达量最高的是闭壳肌,各组织之间无显著性差异。通过原位杂交技术确定了HcPKC基因在外套膜组织中的具体表达位置,信号出现在边缘膜处,而在其他位置尚未看到有明显信号。3.三角帆蚌HcPKC基因SNP筛选与内壳色性状的关联性分析三角帆蚌HcPKC基因可以通过影响黑色素合成从而影响三角帆蚌珍珠层颜色,为进一步研究三角帆蚌HcPKC基因与三角帆蚌珍珠层颜色参数的相关性,获得HcPKC基因的全长并在外显子处设计引物,经过测序筛选后发现5个SNP位点。经过这些多态性位点与三角帆蚌珍珠层颜色性状相关性分析发现,HcPKC基因上的A+332G位点为中多态性位点,其他4个位点为低多态性位点。各位点间互相有着强连锁性不平衡（D’＞0.75,r~2＞0.33）。单倍型分析后发现,T1在白色群体中出现的频率高于紫色品种。