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淋病奈瑟菌是淋病的致病菌。目前,淋病奈瑟菌的耐药性日趋增强,给淋病治疗带来了困难;已找到的一些淋病奈瑟菌候选疫苗,如Por、Pil、Opa、Los等,都存在不同程度的抗原变异,使淋病疫苗研究产生了障碍,因此人们一直在寻找具有免疫保护性的保守抗原。1999年Plante等首先克隆了淋病奈瑟菌的表面蛋白A(Neisseria surface Protein A, NspA)基因,发现NspA在细胞表面持续表达,保守性高,具有较强的免疫原性,是一个很好的疫苗候选者。本研究着重探讨利用NspA真核表达基因构件制备淋病基因疫苗,并试图利用雌激素建立淋病奈瑟菌小鼠感染模型。一、淋病奈瑟菌NspA基因的克隆与真核细胞表达根据淋病奈瑟菌NspA的基因序列设计一对引物,以淋病奈瑟菌WHO-A株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得具有完整开放读码框(ORF)的NspA抗原基因,将纯化后的PCR产物与线性化质粒pCMVScript连接,转化大肠杆菌DH5α菌株。重组质粒经酶切鉴定和序列分析,证实所克隆的NspA基因阅读框架正确,将NspA基因正向插入真核表达载体pCMVScript的重组质粒命名为pcNspA。以脂质体包裹重组质粒pcNspA转染COS-7细胞,用间接免疫荧光检测,表明转染pcNspA重组质粒的COS-7细胞能瞬时表达NspA抗原。二、小鼠体内NspA基因疫苗诱生特异性抗体研究为进一步研究NspA基因疫苗的免疫保护性,我们将NspA真核细胞表达载体通过三种接种途径(肌肉注射、滴鼻免疫、阴道接种)免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,分别收集小鼠的血清、支气管肺泡洗液、阴道洗液,用间接ELISA方法检