南强菌素中试发酵和制备的标准化

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红树林一直生活在强风、高盐、高温、强紫外辐射、频繁的潮汐和缺氧淤泥的特殊生境中,生活在其组织内部的内生真菌的种类和次级代谢产物多样性也较为丰富。本实验室在红树林植物秋茄叶片中分离得到菌株A123,通过比对ITSrDNA序列,确定其为一株拟茎点霉(Phomopsis sp.)。  去乙酰真菌环氧乙酯(Deacetylmycoepoxydiene,DAM)是从菌株A123中分离得到的具有显著抗肿瘤活性且结构新颖的化合物。DAM含有环氧二烯结构单元,经MTT法检测其对淋巴瘤Raji细胞生长抑制的IC50达到3.0μg/ml,具有很高的研究价值。  本论文通过对诱变后的DAM高产菌株P2-139进行摇瓶培养及中试发酵,初步确立了DAM发酵及制备方法,DAM产量稳定,可达60-80 mg/L。本论文主要研究内容包括:  (1)对菌株P2-139进行5次200 L中试发酵,完成对DAM发酵及制备工艺的标准化。确定其发酵及制备工艺流程为:平板种子→摇瓶种子→50 L发酵罐→200 L发酵罐→发酵液→离心→纳滤→乙酸乙酯萃取→真空浓缩→中压反相制备→结晶→重结晶→洗涤、干燥。晶体为白色针状,无味且易溶于甲醇和丙酮等有机溶剂。干燥后得到的晶体,采用TLC和HPLC方法分析,纯度达到99%。  (2)对菌株P2-139其他次级代谢产物进行分离纯化及结构鉴定。从P2-139菌株发酵粗提物中分离并鉴定了包括DAM和MED在内的12个化合物。
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