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[目 的]糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）是一种常见的糖尿病微血管并发症,但糖尿病并发的肾脏损伤不仅包括DKD,还包括非糖尿病肾病（non-diabetic renal disease,NDRD）,肾活检仍然是诊断DKD的金标准,目前临床缺乏有效鉴别诊断DKD和NDRD的生物标志物。本研究拟采用非标记定量蛋白质组学技术鉴定DKD和NDRD组间的尿液差异表达蛋白,利用生物信息学分析筛选对DKD具有鉴别诊断价值的生物标志物。[方法]1、选择2019年10月30日至2020年11月1日于昆明医科大学第一附属医院、云南省第一人民医院、昆明市延安医院、楚雄州人民医院、西南医科大学附属第一医院肾内科行肾活检的住院患者,收集患者的晨尿。纳入临床资料、实验室指标以及病理资料完整且没有重大慢性疾病的患者,依据肾脏病理结果分为DKD 组、NDRD 组、T2DM 伴 NDRD 组（NDRD-DM）。2、采用倾向性匹配分析（Propensity score matching analysis,PSM）,根据年龄、性别、身体质量指数（Body mass index,BMI）等流行病学资料对三个研究组进行匹配,各组分别挑选10例样本用于蛋白质组学分析。3、Bradford法对尿液样本进行总蛋白定量,凝胶电泳检测尿液蛋白的完整性,各组用80μg总蛋白进行蛋白质组学检测,鉴定和筛选与NDRD组、NDRD-DM组相比DKD组的差异表达蛋白。4、基因本体论（Gene Ontology,GO）、京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）、蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interactions,PPI）等生物信息学方法分析差异表达蛋白。5、根据组织定位、蛋白质的表达差异情况以及文献报道,筛选对DKD具有鉴别诊断价值的潜在生物标志物,并采用受试者工作特征曲线（Receiver-operating characteristic curve,ROC）初步分析其鉴别诊断能力。[结 果]1、293例行肾活检穿刺的患者中,男性134人,女性159人,平均年龄（40.3±13.8）岁,其中 DKD 组 23 例（7.85%）、NDRD 组 243 例（82.9%）、NDRD-DM组27例（9.21%）,NDRD的病理类型多样,包括IgA肾病、膜性肾病、微小病变型肾病、局灶节段性肾小球硬化症等。与NDRD组相比,DKD组患者的年龄偏大、男性患者居多、患高血压的比例、BMI、收缩压（Systolic Blood Pressure,SBP）、尿素（Uric acid,UA）、肌酐（Serum creatinine,Scr）、空腹血糖（Glucose,GLU）、尿总蛋白、微量白蛋白（Microalbumin,mAlb）、尿白蛋白/肌酐（Albumin/creatinine,ACR）也显著增高（P<0.05）,而血红蛋白（hemoglobin,Hb）、估计肾小球滤过率（Estimate the glomerular filtration rate,eGFR）偏低（P<0.05）。与NDRD-DM组相比,DKD患者患高血压的比例、糖尿病视网膜病变（Diabetic retinopathy,DR）的人数更多（P<0.05）,糖尿病病程更长,SBP和Scr较高（P<0.05）,而Hb含量、eGFR和尿总蛋白含量较低（P<0.05）。2、将患者进行PSM分析后,三组患者的年龄、性别、糖尿病病程、BMI、SBP、舒张压（Diastolic Blood Pressure,DBP）、降糖和降压药物服用情况、高血压病程、是否患有心血管疾病等方面没有统计学差异（P>0.05）。3、蛋白质组学技术分析每组10个尿液样本,检测结果经蛋白定量和定性、主成分分析（Principal component analysis,PCA）、相对标准差（Relative standard deviation,RSD）和皮尔森相关性分析,结果表明所挑3组样本符合蛋白质组学质量控制的要求。4、采用非标记定量蛋白质组学技术筛选三组间的差异表达蛋白,DKD与NDRD组间差异蛋白有193个,其中104个上调,89个下调;DKD与NDRDDM组间的差异蛋白有443种,其中210个上调,233个下调。5、GO分析结果显示DKD/NDRD组共注释到12个生物学过程、8个细胞组成、7个分子功能;DKD/NDRD-DM组共注释到14个生物学过程、8个细胞组成、6个分子功能。与另外两个组比较,DKD组的差异表达蛋白主要涉及的生物学过程为生物学调节、对刺激的反应、代谢过程等;主要定位于细胞、细胞器和细胞膜等细胞组分上;涉及结合、催化活性、分子功能调节等分子功能。对蛋白质进行亚细胞定位注释,结果显示其亚细胞结构定位主要位于胞外、细胞质。通过对组间差异表达蛋白进行KEGG通路注释和富集发现两个比较组中的共同通路是NF-kappa B信号通路,涉及到的差异表达蛋白为B细胞抗原受体（B cell antigen receptor,BCR）、脂多糖结合蛋白（Lipopolysaccharide-bindingprotein,LBP）、血管细胞粘附蛋白 1（Vascular cell adhesion protein 1,VCAM1）;在 DKD 组与NDRD-DM的比较中,发现补体和凝血级联反应也是一个重要的信号通路,定位到该通路中的差异表达蛋白为补体因子H相关蛋白1（Complement factor H-related protein 1,CFHR1）、补体成分 3（Complement component 3,C3）、抗凝血酶 Ⅲ（Antithrombin-Ⅲ,SERPINC1）、补体因子 Ⅰ（Complement factor Ⅰ,CFI）、凝血因子 X（Coagulation factor X,F10）、维生素 K 依赖蛋白 S（Vitamin K-dependent protein,SPROS1）、补体因子 H 相关蛋白 5（Complement factor H-related protein 5,CFHR5）等。6、通过生物信息学分析,本课题首先筛选肾脏高表达且在DKD组差异表达的蛋白质,结果发现G/T错配特异性胸腺嘧啶DNA糖基化酶（G/T mismatch-specific thymine DNA glycosylase,TDG）、低密度脂蛋白受体相关蛋白12（Low-density lipoprotein receptor-related protein 12,LRP12）、解聚蛋白（Destrin,DSTN）、胶原 a-1（Ⅰ）链（Collagen alpha-1（Ⅰ）chain,COL1A1）、肌营养蛋白（Myotrophin,MTPN）的差异倍数较大且变化趋势一致。其次,我们对在DKD组高表达的蛋白质进行文献检索,筛选出与糖尿病或肾病相关的10种蛋白质。经ROC曲线分析,结果表明除了在肾脏组织高表达的TDG（0.585）、LRP12（0.535）外,其余蛋白质的AUC均在0.75以上。因此DSTN、COL1A1、MTPN、脑特异性血管生成抑制剂1相关蛋白2样蛋白1（Brain-specific angiogenesis inhibitor 1-associated protein 2-like protein 1,BAIAP2L1）、C3、肝素辅因子 2（Heparin cofactor 2,SERPIND1）、α-2-巨球蛋白（Alpha-2-macroglobulin,A2M）、胎球蛋白B（Fetuin-B,FETUB）、免疫球蛋白重链可变区 3-9（Immunoglobulin heavy variable 3-9,IGHV3-9）、免疫球蛋白重链可变区 3-21（Immunoglobulin heavy variable 3-21,IGHV3-21）、原肌球蛋白-1（Tropomyosin 1,TPM1）、肽基甘氨酸α酰胺化单加氧酶（Peptidyl-glycine alpha-amidating monooxygenase,PAM）、谷胱甘肽 S 转移酶P1（Glutathione S-transferase P1,GSTP1）可作为DKD潜在的鉴别诊断生物标志物。[结 论]利用蛋白质组学技术筛选出的DSTN、COL1A1、MTPN、BAIAP2L1、C3、SERPIND1、A2M、FETUB、IGHV3-9、IGHV3-21、TPM1、PAM、GSTP1 对DKD和NDRD,对DKD的鉴别诊断具有一定价值,有望成为鉴别两种疾病的生物标志物。