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气肿疽(Clostridium chauvoei infection),病原为气肿疽梭菌,是一种急性、热性、败血性传染病。常见的典型症状为肌肉丰满部位发生炎性、气性肿胀,触压有捻发音,有一定的地区流行性、季节性,多发生在潮湿的山谷牧场、天气炎热的多雨季节。近几年吉林省延边州相继爆发牛气肿疽,给畜牧业和养殖业的发展带来了巨大的冲击和经济损失,同时也逐渐地威胁到人类的安全和生产。本研究根据NCBI上气肿疽梭菌细胞毒素A(CctA)基因序列,设计两对特异性引物。一方面,将采集延边地区165头份的牛血液样本,分别进行血涂片镜检和PCR检测,再应用统计学对各组数据分析。另一方面,采用疑似感染气肿疽梭菌的牛肝脏、脾脏、心脏及肌肉等组织进行分离,应用病原学检查、生化鉴定、动物实验、分子生物学方法进行鉴定。将PCR扩增的CctA基因克隆至pMD19-T simple载体,对测序正确的CctA基因序列分析,然后亚克隆至pVAX-1真核表达载体,将构建的pVAXl-CctA真核表达质粒转入Vero细胞中,通过间接免疫荧光(IFAT)和免疫印迹(Western blotting)检测CctA基因的表达产物。结果显示,PCR方法检测牛气肿疽的平均阳性率为15.2%,应用统计学分析表明,牛气肿疽感染率在不同县市、不同品种之间差异性不显著(P>0.05)；而不同年龄、不同地理条件气肿疽感染率差异性显著(P<0.05)；在个体农户的饲养方式中阳性率显著高于规模化的养殖方式(P<0.01)；说明牛感染气肿疽梭菌主要受年龄段、地理条件、饲养方式等因素的影响较大。气肿疽梭菌扩增的CctA基因大小为501 bp,测序得到的CctA基因核苷酸与氨基酸序列与气肿疽梭菌ATCC10092菌株进行同源性比对分析,有3处点核苷酸突变,核苷酸序列同源性为99.4%；存在着2个位点的氨基酸特异性改变,氨基酸序列同源性为98.8%。转染的pVAX1-CctA组的细胞有绿色荧光,且pVAX1-CctA重组质粒表达产物大小约为19 kDa,表明pVAX1-CctA质粒在Vero田胞中成功表达了CctA蛋白。本研究更好地预测和分析了本地区分离株的信息,对预防和控制气肿疽提供了参考,为气肿疽的核酸疫苗研制奠定了深厚的基础。