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目的:前期研究中我们发现,雌激素通过雌激素受体β(ERβ)显著上调转移关键分子基质金属蛋白酶2(MMP2)促进非小细胞肺癌转移,但机制不明。TLR4通过激活下游通路myd88/NF-κB/MMP2是公认的促转移通路。本研究旨在探讨非小细胞肺癌转移过程中雌激素通过ERβ对TLR4及下游通路的影响和对NSCLC促转移效应以及探讨ERβ与TLR4在胞质中共定位现象和其相互直接结合机制。最后,我们通过联合给予ERβ与TLR4受体激动剂E2+LPS干预观察其是否能协同促进NSCLC细胞转移,其效果是否优于单一药物干预。方法:(1)通过选取NSCLC的肿瘤组织标本241例和30例配对淋巴结患者标本并制作组织芯片,通过免疫组织化学检测各组织中ERβ和TLR4的表达,并分析其相关性。(2)体外环境下给予NSCLC细胞单独或联合雌激素(E2)或雌激素受体抑制剂氟维司群(Ful)刺激,观察TLR4及其下游通路蛋白表达变化情况;进一步构建并转染siRNA-ERβ和ERβ过表达质粒,观察其对TLR4及其下游通路蛋白表达影响。(3)体外实验中通过特异性敲降或抑制TLR4表达观察由雌激素引起的促NSCLC转移效应是否受到抑制。(4)通过共聚焦显微镜在高倍镜下观察NSCLC细胞系中ERβ和TLR4的亚细胞定位和相对表达强度,进一步通过蛋白-蛋白免疫共沉淀技术分析ERβ是否与TLR4存在直接结合。(5)体外通过Wound-healing assay和Transwell migration/invasion assay检测联合E2+LPS干预条件下NSCLC细胞的迁移和侵袭效应;进一步通过3D球形侵袭实验、荧光明胶基质降解实验和明胶酶谱法分析联合干预条件下是否显著促进NSCLC细胞伪足加速形成和侵袭活性。最后,我们通过NOD/SCID小鼠构建A549细胞肺转移瘤并给予药物干预,观察联合E2+LPS在体内环境下促转移效果是否优于单一药物干预。结果:通过对NSCLC各组织进行特异性ERβ和TLR4免疫组化染色后发现,在原发灶组织和转移淋巴结中ERβ与TLR4共同高表达并相互之前呈现显著的正相关性,且转移淋巴结中相关性显著高于原发灶;体外通过给予雌激素干预能显著上调TLR4表达及激活下游通路myd88/NF-κB/MMP2;机制研究中,我们通过共聚焦显微镜和蛋白免疫共沉淀实验发现ERβ与TLR4在NSCLC细胞中存在共定位现象及直接结合机制;最后,我们在多层面的体外和体内模型中探讨发现联合雌激素和脂多糖能协同促进NSCLC细胞转移。结论:我们在前期研究基础上从ERβ下游信号通路层面进一步分析了雌激素促进转移机制,雌激素通过激活ERβ显著上调TLR4表达及其下游myd88/NF-κB/MMP2通路并最终促进NSCLC转移。联合给予E2+LPS干预下对促进NSCLC细胞转移效果优于E2或LPS单一药物干预。为NSCLC转移的复杂过程和机制提供新的认识,提示抑制雌激素通路进而抑制NSCLC转移有潜在应用价值。