【摘 要】
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目的:明确肿瘤坏死因子诱导蛋白8样蛋白3(TIPE3)在结直肠癌(CRC)中的表达水平及其与患者临床病理因素、预后的关系。方法:(1)收集 HT29、LOVO、LS174T 和 SW480 CRC 细胞与 NCM460 正常肠粘膜上皮细胞的总蛋白,使用Western blot方法检测CRC细胞和正常对照细胞中TIPE3的表达水平;(2)扩增GFP标记的TIPE3过表达慢病毒质粒pLenti6.3/
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目的:明确肿瘤坏死因子诱导蛋白8样蛋白3(TIPE3)在结直肠癌(CRC)中的表达水平及其与患者临床病理因素、预后的关系。方法:(1)收集 HT29、LOVO、LS174T 和 SW480 CRC 细胞与 NCM460 正常肠粘膜上皮细胞的总蛋白,使用Western blot方法检测CRC细胞和正常对照细胞中TIPE3的表达水平;(2)扩增GFP标记的TIPE3过表达慢病毒质粒pLenti6.3/TIPE3/IRES/GFP、对照空慢病毒质粒 pLenti6.3/IRES/GFP 及辅助质粒 pLP1、pLP2、VSVG,共转染293T细胞后制备TIPE3过表达慢病毒(LV-TIPE3)和对照空病毒(LV-NC);(3)使用 50MOI 的 LV-TIPE3、LV-NC 分别感染 SW480 CRC 细胞,通过杀稻瘟菌素筛选获得稳定过表达TIPE3的CRC转基因细胞SW480-TIPE3及其对照细胞SW480-NC,并荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达,Western blot、qRT-PCR检测SW480-TIPE3细胞中TIPE3的过表达情况;(4)通过划痕、Transwell侵袭实验检测TIPE3过表达对CRC细胞体外迁移、侵袭能力的影响;(5)收集、选择107例CRC手术患者的癌组织和配对的癌旁组织制备CRC组织芯片(107例)和购买商品化CRC组织芯片(HCo1A180Sull)(93例),通过免疫组化的方法检测上述CRC组织芯片中癌组织和癌旁组织中TIPE3的表达情况,并分析癌组织TIPE3表达水平与各临床病理因素之间的关系；(6)通过随访TIPE3高表达组、低表达组CRC患者的总生存时间,并通过GEPIA分析TCGA癌症公共数据库,分析TIPE3表达水平与CRC患者预后的关系。结果:(1)与人正常肠粘膜上皮细胞NCM460比较,CRC细胞中TIPE3的表达水平升高;(2)建立了 TIPE3稳定过表达的CRC转基因细胞株SW480-TIPE3和对照细胞SW480-NC;(3)慢病毒介导的TIPE3过表达CRC细胞SW480-TIPE3的迁移、侵袭能力较对照细胞SW480-NC明显增强;(4)CRC癌组织中TIPE3的表达水平较癌旁组织对照明显上调,并且癌组织中TIPE3的表达水平与CRC患者的淋巴结转移、肿瘤分期恶性临床病理特征呈正相关;(5)TIPE3高表达组CRC患者的总生存时间较低表达组CRC患者更短,与GEPIA分析TCGA数据库的预后数据相一致。结论:TIPE3在CRC中表达升高。TIPE3具有促进CRC细胞迁移、侵袭的能力。TIPE3表达水平与CRC患者的淋巴结转移、肿瘤分期恶性临床病理特征呈正相关,并且TIPE3表达高与CRC患者的不良预后密切相关。
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