【摘 要】
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菊苣（Cichorium intybus L.）是菊科菊苣属的多年生植物,在世界各地均有分布,在我国主要产地为新疆、内蒙古等地方。菊苣不仅可以作为蔬菜食用,还可作为药材使用,其含有多糖、黄酮类、生物碱等多种生物活性物质,具有较好的药用价值。黄酮类化合物是植物产生的一类次级代谢产物,具有抗氧化、降糖、降脂、保护器官、抗肿瘤、抑制病毒、抗炎症、改善心血管等多种功效。本研究以菊苣根作为原料,采用响应面设
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菊苣（Cichorium intybus L.）是菊科菊苣属的多年生植物,在世界各地均有分布,在我国主要产地为新疆、内蒙古等地方。菊苣不仅可以作为蔬菜食用,还可作为药材使用,其含有多糖、黄酮类、生物碱等多种生物活性物质,具有较好的药用价值。黄酮类化合物是植物产生的一类次级代谢产物,具有抗氧化、降糖、降脂、保护器官、抗肿瘤、抑制病毒、抗炎症、改善心血管等多种功效。本研究以菊苣根作为原料,采用响应面设计优化了复合酶辅助超声波法提取菊苣根总黄酮的工艺条件。通过菊苣根总黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基（·OH）的清除作用,研究了其体外抗氧化活性。选用AB-8大孔树脂和聚酰胺树脂对菊苣根总黄酮进行分离、纯化,探讨了不同状态（静态、动态）下的分离、纯化效果。采用紫外吸收光谱和显色反应法,初步鉴定了菊苣根提取液中的黄酮类化合物。最后,通过小鼠灌胃不同浓度菊苣根总黄酮,分析了总黄酮在体内的生理活性和对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。1.本研究采用超声波技术,并辅以复合酶（纤维素酶:果胶酶=1:1）解提取的方法,设计单因素试验并通过Box-Behnken响应面法优化菊苣根总黄酮提取工艺,建立了总黄酮得率的模拟回归方程,且模型拟合程度较好。最终确定最佳工艺条件为:酶解时间为66 min、复合酶的用量为2.2%、超声功率为59 W、液料比为37:1 m L/g、超声时间为24 min,在该条件下总黄酮得率的理论值为5.52 mg/g。对以上工艺条件进行验证,测得菊苣根总黄酮得率为5.43±0.12 mg/g,与模型预测的理论值接近。2.以维生素C作为对照,研究了菊苣根总黄酮的体外抗氧化活性,结果表明,当菊苣根总黄酮浓度在0.1 mg/m L时,对DPPH自由基、ABTS自由基和·OH自由基的清除率分别为84.45%、98.18%和78.61%,IC50值分别为0.04、0.021、0.019 mg/m L,菊苣根总黄酮表现出较好的体外抗氧化活性。3.采用AB-8大孔树脂和聚酰胺树脂,通过静态、动态的吸附与解吸试验,探讨了菊苣根总黄酮的分离与纯化效果。AB-8大孔树脂的动态吸附量、吸附率及解吸率分别为78.53 mg/g、84.37%和89.15%。聚酰胺树脂的动态吸附量、吸附率及解吸率分别为70.39 mg/g、83.18%和69.43%。结果表明,AB-8大孔树脂较聚酰胺树脂,吸附量大,而且解吸率较高。另外,AB-8大孔树脂与聚酰胺树脂均能提高菊苣根总黄酮的纯度,经过聚酰胺树脂纯化后的总黄酮纯度能达到80.2%,纯化效果明显优于AB-8大孔树脂（45.12%）。采用紫外吸收光谱和显色反应初步鉴定菊苣根提取液中的黄酮类化合物,结果显示,经树脂分离与纯化后的菊苣根总黄酮溶液中存在二氢黄酮类、黄酮和黄酮醇类物质。4.通过灌胃菊苣根总黄酮（低、中、高剂量组分别为50、100、200 mg/（kg·d））,并建立急性酒精性肝损伤动物模型,采用试剂盒检测和肝组织切片的分析手段,分析了菊苣根总黄酮在体内的生理活性和对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。结果如下:1)整个灌胃期间,所有组的小鼠生长状态良好,菊苣根总黄酮对小鼠的体重没有明显的影响,各组间差异不显著（P>0.05）。2)灌胃高剂量的菊苣根总黄酮,小鼠的肝脏指数明显降低,但各组之间小鼠的脾脏、胸腺和肾脏指数不存在显著性差异（P>0.05）。3)与模型组相比,高、中剂量的菊苣根总黄酮可有效减轻小鼠肝细胞的损伤程度,从而使得血清中谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）活性与总胆固醇（Total cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglyceride,TG）含量处于较低的水平。4)与模型组相比,菊苣根总黄酮各剂量组小鼠肝脏内谷胱甘肽（Glutathione transferase,GSH）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性均保持在较高的水平,且丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量较低（P<0.05或P<0.01）。5)小鼠肝组织切片结果显示,与模型组相比,菊苣根总黄酮高、中、低剂量组小鼠肝组织的损伤程度均有减轻,尤其是高剂量组效果最明显。综上,预先对小鼠进行菊苣根总黄酮干预,能够有效预防和缓解小鼠急性酒精性肝损伤,增强肝组织的抗氧化能力,保护肝脏的各项生理功能。
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