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子宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。由于筛查的推广应用,其发病率和死亡率明显下降,但近年来宫颈腺癌(包括腺鳞癌)的发病比率却呈上升趋势。由于腺癌对放疗不敏感,临床化疗效果欠佳,因此寻找一种合理的治疗方案在临床上具有重要意义。HER-2/neu又称c-erbB-2基因,其编码蛋白称P185c-erbB-2,是一种跨膜受体糖蛋白,能参与细胞生长、分化调节。Ras基因编码蛋白称P21ras,可以与GTP或GDP高特异性结合,具有生物开关作用。HER-2/neu与配体结合可以激活Ras,导致Ras/Raf/MAPK途径的活化,诱导基因转录及细胞增殖。Herceptin是针对HER-2/neu的人源化单克隆抗体,是一种针对酪氨酸激酶的靶向性药物,具有阻断信号转导和抑制细胞增殖的作用。本实验以宫颈腺癌HeLa、鳞癌SiHa细胞作为靶细胞,研究Herceptin对两种细胞的抑制差异、与卡铂(Carboplatin,CBP)间的协同效应。同时通过检测HER-2/neu和其下游的Ras癌基因变化来推测Herceptin对宫颈癌细胞的抑制机制。以此对Herception应用于宫颈腺癌的治疗进行有效性评估。目的:1.研究HER-2/neu和Ras癌基因在宫颈腺癌、鳞癌组织和细胞中的表达及与临床病理的关系,以推测在宫颈癌发生发展中的作用;2.观察Herceptin对宫颈腺癌HeLa、鳞癌SiHa细胞生长的抑制差异,探讨Herceptin与卡铂的协同作用情况及机制;3.研究Herceptin抑制宫颈癌细胞增殖机制。方法:1.免疫组化SP法检测20例正常宫颈、40例宫颈腺癌和45例鳞癌组织中以及宫颈腺癌HeLa细胞、鳞癌SiHa细胞中P185c-erbB-2和P21ras蛋白的表达情况;2. MTT比色法检测Herceptin对HeLa、SiHa细胞增殖的抑制作用,并通过抑制率判断Herceptin和卡铂联用效果;3.光镜、透射电镜观察用药后肿瘤细胞超微结构改变;4.流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期变化;5. FITC免疫荧光标记法检测Herceptin作用后宫颈癌细胞中Ras癌基因变化;6. RT-PCR法检测用药后HER-2/neu和Ras mRNA表达水平;7. Western Blot法检测HER-2/neu和Ras蛋白表达情况。结果:1.在正常宫颈组织中P185c-erbB-2和P21ras蛋白均不表达,腺癌组和鳞癌组表达显著高于正常组(P<0.0125),同时腺癌组明显高于鳞癌组(P<0.0125);P185c-erbB-2和P21ras蛋白的阳性表达率与细胞分化级别相关(P<0.0125),且两者在宫颈癌中的表达具有显著相关性(P<0.01);P185c-erbB-2和P21ras蛋白在宫颈腺癌HeLa细胞中多为阳性表达,而在鳞癌SiHa细胞中为弱阳性或阴性表达;2.经Herceptin作用后HeLa细胞超微结构表现为晚期凋亡改变,而SiHa细胞中多为早期凋亡改变;Herceptin能明显抑制宫颈癌细胞生长,与卡铂间具有协同作用(P<0.05,P<0.01);能诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G1期,与卡铂联合作用后凋亡率更高,使细胞周期进一步阻滞于G2期,同时降低S期比例;与鳞癌SiHa细胞相比腺癌HeLa细胞中凋亡和周期变化更明显;3. Herceptin作用后细胞中Ras荧光表达量降低;HER-2/neu和Ras mRNA及蛋白的表达也显著降低(P<0.05),同样在HeLa细胞中降低的更明显。结论:1. HER-2/neu和Ras蛋白在宫颈癌组织和细胞中同时存在过表达,尤其在腺癌中明显;2. Herceptin使宫颈癌细胞阻滞于G1期、降低S期细胞比例,并诱导凋亡,其与卡铂间具有协同作用;3. Herceptin通过阻断TPK/Ras/MAPK通路抑制宫颈癌细胞增殖,腺癌HeLa细胞表现更敏感,临床有望成为宫颈腺癌的靶向性药物。