【摘 要】
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目的:生长抑制特异性基因（growth arrest-specific gene）是指在培养过程中由于血清饥饿或细胞接触性抑制时表达上调的基因,编码多种具有不同功能的蛋白质。Gas8 （growth arrest-specific8）是生长抑制特异性基因编码的蛋白之一。本实验的目的是制备Gas8抗体,检测小鼠各组织中Gas8表达情况,并利用酵母双杂交系统筛选Gas8相互作用蛋白。方法:在大肠杆菌E
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目的:生长抑制特异性基因（growth arrest-specific gene）是指在培养过程中由于血清饥饿或细胞接触性抑制时表达上调的基因,编码多种具有不同功能的蛋白质。Gas8 （growth arrest-specific8）是生长抑制特异性基因编码的蛋白之一。本实验的目的是制备Gas8抗体,检测小鼠各组织中Gas8表达情况,并利用酵母双杂交系统筛选Gas8相互作用蛋白。方法:在大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中表达带His标签的Gas8融合蛋白。以纯化后的重组蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔,制备Gas8多抗血清,并且进一步利用亲和纯化方法分离Gas8多克隆抗体。为检测Gas8抗体特异性,利用抗Flag单克隆抗体,通过Western blot分析瞬时表达的Flag-Gas8融合蛋白作为参照。利用制备的抗体通过Western blot方法检测Gas8在小鼠各组织中的表达谱。以Gas8为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法筛选Gas8相互作用蛋白。结果:结果显示获得了特异性抗Gas8抗体,并且用该抗体可以检测到小鼠组织中Gas8表达。利用cdc25H酵母系统没有统筛出阳性克隆。利用AH109酵母系统筛选出3个阳性克隆。结论:特异性结合于Gas8的抗体能够通过免疫法获得。利用制备的抗体检测到Gas8在小鼠心、肺、肾、脑、肝、脾、肌肉、睾丸各组织中均有表达。筛选结果表明Rarres2蛋白,CUTC蛋白,EIF2B1蛋白与Gas8蛋白可相互作用。
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