背景:黑素是黑素细胞在黑素小体中经过一系列复杂的生物过程形成的,其合成过程受到多种生物学因素和分子通路的影响。如果在黑素合成过程中任一环节出现问题都可能引发皮肤色素异常,譬如色素沉着和色素减退。在黑素合成过程中,MITF作为关键转录因子,通过调节3种黑素合成酶（TYR、TYRP-1和TYRP-2）影响黑素细胞的黑素合成。MITF的转录激活受多个分子通路和转录因子影响,包括Wnt/β-catenin通路、α-MSH、PAX3、SOX家族以及一氧化氮等。ABCB6是基于DUH的致病基因研究而鉴定出的一种色素代谢调控因子,然而迄今仍未明确其调控黑素代谢的具体机制。目的:本实验旨在研究ABCB6对黑素合成的调控作用。方法:将人ABCB6敲减慢病毒和对应空载慢病毒分别转染至人黑素瘤细胞系MNT-1和人正常黑素细胞系PIG1细胞中,构建稳转细胞系。通过real-time PCR和western blotting实验,检测ABCB6稳转细胞系的敲减效率。在透射电子显微镜下观察并计数各期黑素小体的数量,比较各期黑素小体的数量变化;采用Na OH裂解法检测MNT-1和PIG1细胞各处理组的黑素含量变化。采用转录组测序和real-time PCR筛选ABCB6敲减组与对照组的差异表达基因,通过KEGG数据库对差异基因进行了富集分析。通过免疫荧光检测目的蛋白的亚细胞定位,验证ABCB6敲减细胞系的蛋白定位改变情况。最后,通过免疫共沉淀（Co-IP）和western blotting验证Wnt通路及黑素合成关键分子的蛋白水平变化。结果:将6条ABCB6敲减慢病毒分别转染至MNT-1细胞中,real-time PCR和western blotting检测发现:sh ABCB6#1和sh ABCB6#4慢病毒敲减效果最明显,后续实验将选用这两株ABCB6敲减细胞系进行;同时将sh ABCB6#1和sh ABCB6#4慢病毒感染至PIG1细胞中,real-time PCR和western blotting验证敲减效率,两个靶点在m RNA和蛋白水平对ABCB6的敲减效率均在50%以上。通过透射电镜和黑素含量检测,发现下调ABCB6的表达可以阻碍MNT-1和PIG1细胞黑素小体的成熟,减少黑素的产生。此外,通过real-time PCR和western blotting检测发现:敲减ABCB6可以抑制MITF及其下游3个黑素合成酶的表达。采用转录组测序、KEGG通路富集分析和real-time PCR检测发现:ABCB6可以通过Wnt/β-catenin通路调控黑素细胞的黑素合成,且该通路中的关键分子GSK3-β、APC、β-catenin在m RNA表达水平存在明显改变。通过免疫荧光实验发现:ABCB6和GSK3-β在MNT-1和PIG1细胞中存在广泛的共定位,下调ABCB6的表达明显减少β-catenin在PIG1细胞中的核定位。最后,通过Co-IP和western blotting实验发现:ABCB6通过与GSK3-β相互作用而影响黑素合成;下调GSK3-β后,ABCB6对黑素合成及相关分子的作用消失。结论:本研究结果表明ABCB6通过GSK3-β/β-catenin信号轴参与黑素细胞的黑素合成,为完善ABCB6在黑素代谢过程中作用的认识提供了新的科学证据。