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大豆(Glycine max),因为其营养丰富大豆制品作为食品配料、饲料成分被广泛应用。然而,大豆过敏原会引起敏感个体严重的过敏反应。由于食品产品的错误标签、食品加工过程中的交叉污染,或者在一种成分中存在未标明的大豆成分,可能会导致过敏个体接触过敏原,威胁健康。为了尽量减少意外摄入的过敏食品,标签必须提供有关成分表的准确信息。一些国家已经制定了保护过敏个体的标签准则,但这些法规的执行取决于是否有灵敏和准确的分析方法来验证标签的准确性。目前,过敏原检测方法主要包括DNA和免疫化学技术。食品标签规定要求检测过敏成分本身而不是过敏蛋白。根据这一点,DNA比蛋白质更稳定的目标分子,而且它不受影响地理或季节变化的影响。然而,尽管它的灵敏度很高,但在过敏原检测中使用DNA分析是有争议的,因为它没有直接检测过敏原或任何特定的蛋白质。免疫化学技术是基于抗体和抗原之间的相互作用,检测原可以是过敏原或标记蛋白质。酶联免疫吸附测定法(ELISA)是最广泛使用的一种用于常规筛选食物中的过敏原的技术。噬菌体展示技术是一种替代传统的抗体生产的方法,可产生大量的氨基酸序列明确且稳定的特异性抗体。噬菌体展示技术采用重组噬菌体库,通过体外淘选技术筛选出与抗原高亲和力的抗体。在食品科学方面,噬菌体展示技术已成功应用于监测食品中出现的伤寒沙门氏菌或检测牛奶中梭状芽胞杆菌的孢子等。(1)使用原核表达系统表达细菌Gly m Bd 28K大豆蛋白,表达并纯化获得Gly m Bd28K重组蛋白,辅以佐剂免疫鸡,在五免后采取鸡脾脏。对获得的鸡脾脏提取RNA后鉴定,反转录反应后获得cDNA,使用PCR的以cDNA为模板扩增重链与轻链,以重链和轻链为模板进行重叠PCR获得单链抗体的基因。对噬菌体库进行亲和性生物淘选。并在特异性富集的四级库里筛选表现阳性的单克隆基因型,以Phage-ELISA的方法确定高特异性抗体基因型。(2)以筛选获得的阳性克隆为模板,PCR扩增获得阳性克隆重组单链抗体片段,克隆片段与pET-30a载体双酶切后连接获得pET-30a/scFv表达载体后获得重组单链抗体表达菌株。大量诱导表达后经鉴定以包涵体形式表达,收集包涵体后进行变性复性纯化。Western Blot、SDS-PAGE鉴定蛋白的纯度与质量用于后期实验。