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目的：检测转基因番茄中目的蛋白PAcA的表达及含量，并观察其免疫BALB/c小鼠和SD大鼠后的免疫效果，为下一步利用转基因植物技术生产可食嵌合体防龋疫苗的研究打下基础。
方法：本研究包括四个部分：第一部分：PCR法鉴定变形链球菌表面蛋白PAcA与霍乱毒素B亚单位融合基因转基因番茄子代植株。第二部分：转基因番茄中外源性目的蛋白表达的检测。1.提取植物蛋白，并采用BCA法测定总蛋白的含量。2.Western blot确定目的蛋白的表达。3.ELISA法检测外源性目的蛋白的浓度。第三部分：表达嵌合蛋白PAcA/CTB的转基因番茄免疫BALB/c小鼠的实验研究。1.动物的选择与分组：18只6-8周龄的雄性BALB/c小鼠，随机分为3组，每组6只，分别为：①实验组：喂食含有PAcA/CTB嵌合蛋白的转基因番茄汁。②阴性对照组：喂食非转基因番茄汁。③阳性对照组：喂食灭活全菌疫苗。2.免疫途径：灌胃免疫。3.免疫时间：每周一次，共四次。4.样品采集时间：分别于首次免疫前和免疫后第1、2、3、4周采集血液、唾液样品，称体重。5.特异性抗体的检测：血清中IgG和唾液中SIgA采用酶联免疫吸附实验(间接ELISA法)检测。6.取小鼠心、肝、脾、肺、肾做HE染色病理切片，观察免疫前后各器官组织形态结构变化。第四部分：表达嵌合蛋白PAcA/CTB的转基因番茄免疫SD大鼠的实验研究。1.动物的选择与分组：18只18天龄的雄性SD大鼠，随机分为3组，每组6只，分别为：①实验组。②阴性对照组。③阳性对照组。2.建立龋病动物模型3.免疫途径：灌胃免疫。4.免疫时间：第29天龄开始免疫，每周一次，共免疫四次。5.样品采集时间和特异性抗体的检测同免疫小鼠。6.取上下颌骨标本，进行龋齿计分。
结果：①转基因番茄植株总DNA经PCR扩增、电泳后见约1.7kb扩增条带，与阳性对照一致。②BCA法测得总蛋白含量约3.5mg/ml，经SDS-PAGE电泳分离出分子量约6.0×104大小的蛋白条带，Western blot杂交证实该条带为嵌合蛋白PAcA/CTB。目的蛋白表达量约4.12μg/ml，占总蛋白的0.13％。③灌胃免疫后，小鼠和大鼠血液和唾液中抗特异性抗体从免疫后1周开始升高，高峰时间为初始免疫后第4周。实验组小鼠和大鼠血清中特异性IgG抗体和唾液中特异SIgA抗体水平显著高于阴性对照组(P<0.01)。④小鼠体重变化趋势显示于第4周实验组与阴性对照组存在差异(P<0.05)；各组大鼠体重变化无明显差异。⑤HE染色病理切片观察，三组小鼠均未发现特异性病理改变。但部分小鼠发生充血、炎症等病理变化。⑥龋齿评分结果显示，疫苗免疫组患龋水平明显低于阴性对照组(P<0.01)，略高于阳性对照组。
结论：①在转基因番茄中成功表达了PAcA/CTB嵌合蛋白，并且该嵌合蛋白具有较好的免疫原性，能诱导小鼠和大鼠的外分泌液和血液中特异性抗变形链球菌表面蛋白PAcA抗体的产生。②表达PAcA/CTB蛋白的转基因番茄防龋疫苗能够降低大鼠的患龋水平，具有保护作用。③口服免疫是简便有效的免疫途径。