放化损伤致血虚证分子基础及四物汤反证研究 中医“证”的动物模型研究关键有两个方面：一为模型本身是否能体现该“证”的临床意义及其病理生理变化实质，是否能量化?另一为模型本身所体现的病理生理反应本质能否被相对应的代表方剂所逆转。以此验证模型的可靠性及实用性，为同类方剂的现代化研究提供实验基础。 1、血虚证研究 在血虚证的研究方面，系统研究了放化损伤致血虚证发生发展的证本质，提出了放化损伤致血虚证动物与外周血各血液成份改变、骨髓造血干／祖细胞的动态变化、骨髓和脾细胞凋亡、CD34~+细胞的改变、细胞周期和造血相关基因的表达等密切相关。并以此评价了四物汤的作用机制及治疗效果。提出了辐射可造成白细胞下降和骨髓造血损伤，是比较好的一种造模方法。剂量分别为2.5Gy、3.5Gy、5.5Gy和7.5Gy，剂量率为161.2～164.8伦/分，照射剂量是此模型的关键所在，因照射剂量小达不到损伤要求，而剂量大，骨髓造血损伤严重受抑，中医药治疗难以逆转。四物汤可以逆转3.5和5.5Gy照射所致该血虚证小鼠外周血的下降，使照后第5、7、9、11天的白细胞数和第1、5天后的血小板数明显高于对照组，而对7.5Gy照射所致的损伤不能逆转。提出照射损伤模型以3.5和5.5Gy的照射剂量为最佳使用剂量。对化学损伤模型，观察了250mg／kg环磷酰胺一次给药和50mg/kg连续给药5天的造模方法，均可使动物外周血在一定程度上下降，但以白细胞影响最为明显。在对骨髓造血干／祖细胞的影响方面，环磷酰胺给药以250mg/kg一次性给药为宜，药后各造血祖细胞集落均明显受抑。照射和环磷酰胺给药后均能使骨髓细胞周期紊乱，细胞凋亡，但各有其变化特点。得出了化学损伤和照射损伤所致动物血虚证的损伤特点：照射损伤着重在骨髓造血的损伤方面，化学损伤着重表现在外周血各血液成分的下降方面，丰富了该模型的研究内容。 2．1 四物汤研究 2.1在建立的放化损伤致血虚证基础上，系统观察了四物汤及其16个不同配伍组方对血虚证小鼠外周血各血液成份的变化、骨髓中干祖细胞的数量和质量、CO34+细胞表达、细胞周期、细胞凋亡、基因组学和蛋白质组学的改变等影响，分析了四物汤补血的可能途径和作用机理。 2.1在拆方研究方面，通过16个不同配伍组方的拆方研究，揭示四物汤全方在拆方中的主导地位:尽管各配伍组方在不同指标上各有特点，如力I芍对凋亡的影响，白芍川芍对细胞周期的影响，白芍对外周血白细胞的影响等，四物汤全方的效果均优于各配伍组方。而在对外周血的影响方面，白芍确属反佐之品。 2.1在物质基础分析方面，采用活性检测指导下的导向分离研究，比较并选择最强活性成分进行追踪，使物质分离和活性分离同步进行，找到四物汤补血的有效物质基础。提出了四物汤补血作用的活性部位主要含一些多糖、单双糖及与其极性相似的一些成分，还有少量中等极性的小分子物质。对B、CZ、C3尤其是C3部位进行进一步的分离分析，并对不同配伍组方与补血物质基础的变化、补血药理效应的变化结合考察，从化学、生物效应两个方面揭示四物汤配伍组方原理的科学内涵。提出了芍药贰的补血作用地位。 此研究为方剂和证候学的结合研究提供了参考模式。