第一部分、小鼠内耳干细胞的分离、培养、鉴定　　 目的：建立小鼠内耳干细胞体外培养的模型。　　 方法：取刚出生的小鼠耳蜗基底膜，体外于无Ca、Mg的D-Hanks溶液中进行分离，单细胞悬液置于含有2％B27、1％N2、50ng/mlIGF-1、20ng/ml EGF、10ng/ml bFGF的DMEM∶F12(1∶1)培养基中悬浮培养。用Abcg2、Brdu免疫荧光法鉴定内耳干细胞。　　 结果：所取的小鼠耳蜗基底膜单细胞可形成集落样生长的内耳干细胞球，Abcg2、Brdu免疫细胞化学染色阳性。　　 结论：新生小鼠基底膜可以体外诱导出表达干细胞标记的球体，具有自我更新能力，可能为内耳干细胞。　　 第二部分、Notch信号对内耳干细胞增殖及干性维持的调节　　 目的：探讨Notch信号通路对内耳干细胞增殖的影响以及对干细胞干性的维持。　　 方法：内耳干细胞培养，一组加含DMSO的培养基，一组加含DAPT的培养基，观察两组球体的数量、大小，用Brdu、Active-notch1、Myosin7a免疫荧光法观察两组细胞表达的差异。　　 结果：球体增殖期有Active-notch1的表达，DMSO组干细胞球体数量与DAPT组无差别，球体体积DMSO组比DAPT组大，DMSO组Brdu阳性细胞数较DAPT组明显增多，DAPT组表达myosin7a，DMSO组不表达myosin7a。　　 结论：notch信号通路的活化抑制内耳干细胞球体的增殖，维持内耳干细胞的干性。　　 第三部分、Notch信号对内耳干细胞分化的作用　　 目的：探讨notch信号通路对内耳干细胞分化的影响。　　 方法：内耳干细胞无血清培养液培养7天后，收集接种盖玻片上进行贴壁分化，分为两组，一组加含DMSO的分化培养基，一组加含DAPT的分化培养基，分化7天后，用myosin7a、P27kip1、F-actin免疫荧光法观察两组细胞表达的差异。　　 结果：DAPT可以促进内耳干细胞向毛细胞方向分化，毛细胞标记myosin7a表达明显增多。F-actin染色显示DAPT处理后具有纤毛结构的毛细胞样细胞数量增加，表达p27kip1的细胞明显减少。　　 结论：notch信号通路的活化抑制内耳干细胞向毛细胞的定向分化，促进内耳干细胞向支持细胞方向分化。