论文部分内容阅读
[目的]研究异种绒毛膜促性腺激素(恒河猴绒毛膜促性腺激素Macaca mulatta chorionic gonadotrophin,rmCG)β亚基DNA抗肿瘤疫苗的可能性,为肿瘤的免疫生物治疗寻求新途径。 [方法](1)人工合成rmCGβ亚基全长cDNA编码序列构建真核质粒表达载体pcDNA3.1(+)-rmCGβ、pcDNA3.1(+)-Sig-Pr~+-IgGFc-GPI和pcDNA3.1(+)-rmCGβ-Pr~+-IgGFc-GPI,以PCR、限制性酶切和DNA序列测定进行鉴定;(2)BALB/c小鼠皮下接种Renca细胞,肌内注射法对其分别实施20μg,40μg,100μgpcDNA3.1(+)-rmCG,40μg pcDNA3.1(+)-rmCG-Pr+-IgGFc-GPI核酸免疫,以40μg空载质粒为对照,以实体瘤重量评估核酸疫苗体内抑瘤效果;(3)通过脂质体转染的方法将目的基因导入B16小鼠黑色素瘤细胞,G418加压筛选,得到阳性克隆后扩大培养,经RT-PCR、流式细胞仪技术和细胞免疫荧光法检测B16细胞中表达的IgGFc段融合蛋白;(4)将BALB/c小鼠分成rmCG治疗组和空载质粒对照组,分别经小鼠尾静脉注射转染rmCG与转染空载体的B16细胞,两周后观察小鼠肿瘤肺转移灶的个数。 [结果]成功合成rmCGβ亚基全长基因并构建真核质粒表达载体pcDNA3.1(+)-rmCGβ、pcDNA3.1(+)-Sig-Pr~+-IgGFc-GPI和pcDNA3.1(+)-rmCG-Pr~+-IgGFc-GPI;与空载质粒组对比,重组的质粒rmCGβDNA实验组均能诱导小鼠产生显著的抑瘤效果(p<0.01);pcDNA3.1(+)-rmCGβ注射剂量在20μg至100μg之间的pcDNA3.1(+)-rmCGβDNA接种小鼠诱发的免疫反应强度与pcDNA3.1(+)-rmCGβDNA无剂量依赖关系;早用pcDNA3.1(+)-rmCGβDNA免疫接种BALB/c小鼠抑瘤效果优于晚用(p<0.05)。在相同剂量条件下,pcDNA3.1(+)-rmCG-Pr~+-IgGFC-GPI与pcDNA3.1(+)-rmCGβDNA免疫接种BALB/c小鼠都有基本一致的显著抑瘤效果。脂质体疫苗rmCG组小鼠肺部转移灶与空载质粒组相比明