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背景:肺癌是人类癌症死亡的主要原因之一。其中,非小细胞肺癌(non—small cell lung cancer,NSCLC)最为常见,占肺癌的75～80%。Livin基因是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族成员,本课题组的前期实验证实慢病毒载体介导的LivinSiRNA在体外可以有效地促进SPC-A-1细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的增长。本课题在此基础上构建人肺腺癌裸鼠移植瘤模型并将慢病毒携带的livin shRNA注射入瘤体内,以观察沉默livin的表达对SPC-A-1裸鼠移植瘤生长、凋亡以及细胞周期的影响,进一步观察livin是否可成为肺癌基因治疗的靶点,及体内注射慢病毒shRNA的治疗效果。目的:利用慢病毒携带的livin shRNA注射肺腺癌裸鼠移植瘤,干扰livin基因表达,观察其对肺腺癌裸鼠移植瘤生长及细胞凋亡、周期、增殖的影响。方法:将SPC-A-1细胞接种至BALB/C裸鼠右腋皮下,建立SPC-A-1裸鼠皮下移植瘤模型,接种后第8天(移植瘤长至100mm~3左右),按瘤体大小随机分成三组:空白对照组、阴性载体对照组、治疗组。分组后连续四天对三组裸鼠给予不同干预①治疗组:瘤内注射livin shRNA慢病毒颗粒(2×106TU,5ul);②阴性载体对照组:瘤内注射携带无关序列的慢病毒颗粒(2×106TU,5ul);③空白对照组:瘤内注射生理盐水(5ul)。观察裸鼠的一般情况、移植瘤生长情况,测量瘤体体积、瘤体重量,并绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率、western-blot方法检测各组livin表达。原位末端转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染检测移植瘤组织凋亡情况,PI单染法检测移植瘤细胞周期分布情况。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide ,MTT)检测细胞增殖能力。结果:1、livin shRNA慢病毒治疗组livin蛋白表达较对照组明显降低,(P<0.01,P<0.01),提示慢病毒注射瘤体后显著干扰其表达。2、与空白对照组和阴性载体对照组相比,治疗组瘤体生长减缓,移植瘤体积、重量明显减小(F=254.64,P=0.00)。3、沉默livin基因后细胞凋亡明显增加:凋亡指数:(31.48±3.79)% vs(6.55±1.30)%;(7.47±1.28)%,F=203.28,P=0.00。凋亡率:(15.47±1.14)% vs(4.42±0.76)%;(5.26±1.02)%,F=116.39,P=0.00)。4、细胞周期检测结果显示,livin shRNA治疗组移植瘤细胞进入G0/G1期的细胞增多,进入S期的细胞减少,SPC-A-1细胞周期出现G0/G1期阻滞。5、MTT显示细胞增殖减缓, 72h细胞增殖抑制率最高,达到(31.15±4.62)%。结论:在SPC-A-1裸鼠移植瘤中瘤内注射慢病毒介导的livin shRNA成功沉默移植瘤中livin的表达,裸鼠移植瘤细胞周期阻滞,细胞凋亡增加、增殖明显受到抑制,Livin基因可望成为肺癌治疗的新靶点,慢病毒介导的RNA干扰技术可望成为有效的基因治疗工具。