【摘 要】
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EDN又名RNaseU,Ribonuclease2,RNase2,RNS2,mh 135个氨基酸组成,具有远低于RNaseA的核糖核酸水解活性,其生物功能为神经毒和抗艾滋病病毒活性.我们根据Genebank上的EDN的mRNA
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EDN又名RNaseU<,s>,Ribonuclease2,RNase2,RNS2,mh 135个氨基酸组成,具有远低于RNaseA的核糖核酸水解活性,其生物功能为神经毒和抗艾滋病病毒活性.我们根据Genebank上的EDN的mRNA序列,并考虑到在酿酒酵母中高效非分泌表达的需要,将基因中的信号肽序列去掉并将相应的密码子更换为酿酒酵母偏爱的密码子,在基因两端加上HindⅢ和BamHI酶切位点和保护碱基,设计了二十个寡核苷酸片段,化学合成,在T4DNA连接酶作用下连接成完整的基因,并将其定向克隆到穿梭质粒pYES2/CT中,构建了一个新的质粒pYESEDN,分别转入大肠杆菌JM109(DE3)和酿酒酵母INVScl中.结果证明该基因在大肠杆菌中不表达,而在酿酒酵母中得到了表达并形成包涵体,诱导条件为在SC诱导培养基中诱导32hr即可达到最大表达量,表达量为菌体总蛋白量的5.6﹪.我们还测定了表达产物的核糖核酸水解活性并将该酶进行了初步的分离纯化.
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