猪圆环病毒2型(PCV2)是一种与多种猪病的发生都有密切关联的病原,由其引起的猪病被统称为猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)。PCVAD给全球的养猪业造成巨大的经济损失。PCVAD的发生,除了感染PCV2外,还与饲养管理、免疫刺激、混合感染、仔猪断奶时的身体条件、营养条件以及氧化应激等密切相关。目前,商用PCV2疫苗已经用于防治该病,并取得了一定效果,但其存在成本高、效价低、反复感染等缺陷。研究开发成本低、来源广、经济有效、无副作用的药物防治该病发生势在必行。黄芪多糖(APS)有包括抗氧化,抗炎症和抗病毒等在内的多种功能。APS能否抑制PCV2感染及其可能的机制还不清楚。本论文主要对APS抑制PCV2在体内外感染情况及机理进行了研究,从氧化应激、NF-Kappa B以及内质网应激角度阐述APS对PCV2感染的抑制作用。从而,为APS预防PCVAD提供理论指导,并为其在养猪生产上的广泛应用提供科学依据。试验一、黄芪多糖对PCV2体内外感染的影响为研究黄芪多糖(APS)对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的作用,分别使用PK15细胞和小鼠在体内外模拟PCV2感染。体外试验:分别在PCV2感染PK15细胞同时和感染之前加入不同浓度APS处理,测定PCV2 DNA拷贝数和阳性感染细胞数。体内试验:50只2周龄小鼠,随机分为5组,Con组(每日灌服生理盐水组),PCV2组,每日灌服100 mg/kg APS组,每日灌服200 mg/kg APS组,每日灌服400 mg/kg APS组,其中APS处理组14d后与PCV2组同时腹腔注射1000 TCID50 PCV2。试验持续28天,测定各组小鼠PCV2感染情况。体外结果:与PCV2感染细胞同时加入不同浓度APS,APS作用效果不显著;而在PCV2感染细胞前,预先加入不同浓度的APS均可不同程度降低PCV2 DNA拷贝数以及阳性感染的细胞数,且20 μg/mL APS即可达到较好的作用。体内结果:与PCV2感染对照组相比,每日灌服200 mg/kg、400 mg/kg APS的小鼠肺脏、脾脏和肝脏的病理损伤减弱;组织中的PCV2 DNA拷贝数显著降低;免疫组化的结果显示病毒量减少;且肺组织中PCV2 Cap蛋白表达量降低。APS可抑制PCV2体内外的感染。试验二、APS通过抑制氧化应激和阻断NF-Kappa B途径抑制PCV2的复制试验一的结果表明APS能够抑制PCV2的复制。本试验用PK15细胞模型研究其机制,测定了氧化应激指标、NF-κ B的活性;并应用了氧化应激促进剂BSO、NF-κ B的激活剂LPS和抑制剂BAY 11-7082研究其对APS抑制PCV2复制的影响。试验结果显示,APS能显著降低丙二醛水平、活性氧水平和NF-κ B的活性,并能显著增加还原型谷胱甘肽含量及SOD活性。研究结果表明,APS能够抑制BSO通过氧化应激诱导PCV2增殖的作用。APS能够减弱NF-Kappa B的活化剂LPS对PCV2复制的促进作用;APS可以增强NF-κ B的抑制剂BAY 11-7082对PCV2复制的抑制作用。这些结果表明,APS能够减弱氧化应激,并抑制NF-κ B的激活,从而抑制PCV2的复制。试验三、APS通过减弱内质网应激的发生来抑制PCV2的感染试验一与实验二表明,APS能够抑制PCV2感染,且作用机理与其抑制氧化应激有关,为了研究其作用机制,分别用小鼠和PK15细胞为模型进行试验,并应用了内质网应激的激活剂TM研究APS抑制PCV2感染的机制。将50只小鼠随机分成五组(空白组,PCV2 阳性组,APS+PCV2 组,TM+PCV2 组,APS+TM+PCV2 组,每组10只。测定了小鼠氧化应激指标、内质网应激相关基因GRP78 mRNA及蛋白的表达、内质网诱导凋亡基因GADD153/CHOP mRNA及蛋白的表达。结果表明,APS能显著降低TAOC水平、降低由PCV2感染引起的内质网应激相关基因GRP78 mRNA及蛋白的表达、内质网诱导凋亡基因GADD153/CHOP mRNA及蛋白的表达。同时,APS能够减弱ERS的激活剂TM对PCV2感染的促进作用。另外,进行了相应的体外试验,体外与体内的结果基本一致。APS能够通过减弱内质网应激抑制PCV2的感染。