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本研究目的是建立实时定量PCR (RQ-PCR)检测血标本中金黄色葡萄球菌DNA的方法并对临床标本进行初步检测,并建立RQ-PCR快速检测金黄色葡萄球菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素敏感性的方法。在论文第一部分中,选择金黄色葡萄球菌高度保守的看家基因fem A基因作为靶基因设计引物和TaqMan探针,建立RQ-PCR反应体系,并采用QIAamp(?) DNA Blood Mini Kit提取基因组DNA。对26份病人血标本和15份模拟血标本进行RQ-PCR检测。结果显示特异性好,检测限为100拷贝／μl(103 CFU／ml),灵敏度为99.7%,特异度为94.6%。标准曲线线性关系好,R2在0.9918～0.9997之间。不同浓度的金黄色葡萄球菌样本检测的平均准确性为(96.25±2.26)%；批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(8.06±0.07)%和(10.01±4.40)%。血标本中金黄色葡萄球菌(108～104)DNA平均提取效率为(111.72±20.72)%,模拟血标本阳性率为100%,临床血标本阳性率为15.4%,明显高于血培养。显示实时定量PCR可用于定量检测全血标本中金黄色葡萄球菌DNA的含量。论文第二部分,对32例外科发热患者的84份血标本进行了RQ-PCR检测。27个标本检测到金黄色葡萄球菌DNA,阳性率为32.14%,含量约4.36×103～6.39×104CFU/ml,所有患者的血培养结果均为金黄色葡萄球菌阴性。第三部分,在含有相同浓度金黄色葡萄球菌的LB培养基和血中,加入不同的抗生素,并设立生长对照,培养1、2、4、6和8小时后提取标本的基因组DNA,以金黄色葡萄球菌特异的fem A基因的引物和TaqMan探针对标本进行实时定量PCR检测。培养过程中,耐药组与生长对照组的金黄色葡萄球菌DNA拷贝数均呈对数增长,在LB液体培养基中增长约2.14～22.82倍,在新鲜全血中增长约2.20-11.69倍；敏感组金黄色葡萄球菌DNA拷贝数呈持平或减少趋势,在LB液体培养基中保持在2.98～1.30倍,在新鲜全血中则减至0.77～0.11倍；上述药敏结果与常规纸片法一致,但更快速。综合研究结果显示,RQ-PCR技术不仅可用于定量检测患者血中的金黄色葡萄球菌,检出率及速度高于血培养；同时可用于对血中的金黄色葡萄球菌进行快速、准确的药物敏感性试验。