胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESCs)源自植入前的内细胞团，有自我更新的能力，若将ES细胞植入宿主胚胎内，就可以分化为三胚层的任何细胞，在体外ES细胞也可以分化为很多种类的细胞。胚胎干细胞的分化控制是胚胎干细胞研究的一个重要方面，分化研究的前提就是要获得较纯的ES细胞，因此本实验首先建立了分离ES与MEF细胞方法，然后将获得的纯的ES细胞从单层贴壁的途径诱导分化为神经细胞。 本实验建立了一种简单的分离胚胎干细胞和饲养层细胞(MEF)的方法。利用胚胎干细胞与饲养层细胞贴壁的速度不同，通过比较两种细胞在不同时间梯度的贴壁率找出去除MEF的最佳时间；通过二者在不同明胶浓度梯度的贴壁率找出最佳的包被培养板的明胶浓度；通过流式细胞仪检测差速贴壁后的ES细胞得率；通过碱性磷酸酶的活力、纯化前后ES单细胞克隆培养的成功率及Ihh，SM22-α，Nestin等胚层分化标志的检测，鉴别纯化后的ES细胞的质量。结果表明，在1.5h时MEF细胞有97.20％已经贴壁，而ES细胞只有4.32％贴壁，因此，1.5h是分离ES细胞与MEF的最佳差速贴壁时间，用0.5％明胶包被培养板效果最佳，此时ES得细胞得率为97.59％；另外，差速贴壁后的ES细胞碱性磷酸酶活力和克隆率几乎没有改变，三胚层的分化与常规相比也无显著差异，表明纯化的ES细胞仍保持未分化状态并且具有全能性。因此，通过该方法能得到高纯度且仍保持未分化状态的ES细胞，为接下去的单层贴壁诱导分化提供了材料。 本实验第二部分将纯化的ES细胞用于诱导分化实验。首先找到合适的诱导培养液，然后将不同密度的细胞分别接种至培养板中，加入相同的诱导培养液诱导相同的时间，找出合适的接种密度；检测诱导的时间长短及血清的存在与否对ES细胞分化的影响；通过细胞的形态观察、免疫组织化学及RT-PCR的检测显示，ES细胞己分化为神经元。