背景和目的银屑病是一种由免疫介导的自身慢性皮肤炎症性疾病,其主要的组织特征是:(1)表皮棘细胞增生,表皮角化过度和角化不全;(2)乳头状真皮中毛细血管网的扩张;(3)多种炎性细胞的浸润,包括多形核细胞,以及在表皮内富集的中性粒细胞。银屑病的发生涉及多种机制,而在这些因素当中,免疫系统的异常反应是银屑病发病的关键因素,此外与疾病发生相关的基因的影响也比较重要。当前,对于银屑病的治疗主要针对于机体的免疫反应。因此,我们很容易推测出免疫系统的特定缺陷是一种重要的致病原理。有证据表明,患者皮肤中免疫活性细胞异常分泌的细胞因子(特别是IL-6和TGF-α)在银屑病炎症反应中起重要作用。在这些细胞因子的诱导下,T淋巴细胞被异常激活,从而导致细胞因子IL-6、IL-17和IL-1等增加,最终影响角质形成细胞的增殖与分化。有研究显示,IL-6信号通路的活化会影响T细胞的功能。在银屑病的发病过程中,角质形成细胞受炎症因子刺激而异常增殖与分化是银屑病发生发展的终末环节。因此,对细胞因子调节角质形成细胞增殖与分化的机制研究就显得尤为重要。目前,对细胞因子发挥作用的信号通路及其靶基因的研究还较为鲜见。IL-6是一种多功能细胞因子,在免疫反应、急性期反应、造血以及炎症反应中发挥重要作用。此外,它还可调节细胞的增殖与分化。以往的研究已经证实,在银屑病患者的血清和皮损组织中,IL-6的表达水平与正常人相比明显升高。研究发现,IL-6可通过导致Treg细胞与Th17细胞之间的平衡紊乱,而影响银屑病的发生发展。LMO4,作为一种核内转录因子,是LMO蛋白家族成员之一,在细胞生长、分化、器官发育等过程中发挥重要作用。此外,在机体神经系统的发育中,LMO4还参与神经元细胞的增殖与分化等过程。我们前期研究表明,在银屑病发展过程中,细胞因子IL-23能够上调LMO4基因的表达,从而促进角质形成细胞的过度增殖异常与分化。银屑病皮损部位除IL-23外,包括IL-6是否通过影响LMO4表达调控角质形成细胞的增殖和分化,目前不清楚。本研究旨在探讨在角质形成细胞中细胞因子IL-6对转录因子LMO4表达的影响及其分子机制,为银屑病的治疗方案提供新的思路。方法1.组织学水平研究利用免疫组织化学法检测正常组织与银屑病皮损组织中LMO4的表达差异,以及相关皮肤细胞标记分子的变化;同时还检测IL-6的水平及其信号通路的活化状态,探究其与银屑病的相关性。2.细胞水平研究以人的永生化角质形成细胞系为研究对象,利用Western blot、免疫荧光、EDU细胞增殖实验等方法探讨IL-6信号通路如何介导LMO4的表达,从而影响角质形成细胞的增殖与分化。为进一步了解IL-6调控LMO4的分子机制,通过双荧光素酶报告基因系统,突变转录因子结合位点,分析其调控活性。3.动物模型通过给小鼠涂抹咪喹莫特药膏,建立银屑病样小鼠模型,观察其皮肤组织的表型变化。H&E染色分析皮肤组织结构变化,免疫组织化学法检测IL-6与LMO4的表达水平以及IL-6信号通路的活化状态,从体内水平验证IL-6调控LMO4的表达影响角质形成细胞的增殖与分化。结果1.免疫组化结果显示:与正常皮肤组织相比,银屑病皮损部位的IL-6和LMO4表达水平升高,IL-6/MEK/ERK信号通路中p-MEK、p-ERK的活化明显增加。2.Western Blot与免疫荧光结果表明:经IL-6诱导后,角质形成细胞表达角蛋白K14、颗粒层细胞标记分子K10和表皮层标记分子IVL以及LMO4的水平增加,表明IL-6促进了角质形成细胞的分化。Western Blot结果显示:细胞经IL-6处理后,IL-6/MEK/ERK/NF-k B信号通路中p-MEK、p-ERK、p-p65的明显增加,同时伴随着LMO4的表达增高。细胞增殖实验结果表明:经IL-6诱导后,细胞的增殖速度明显加快。通过双荧光素酶报告基因实验得出,IL-6处理的293T细胞在LMO4基因启动子驱动下荧光素酶活性明显增加;当突变启动子中NF-k B结合位点后,经IL-6处理后细胞的荧光素酶活性与对照组相比没有显著性差异。3.银屑病样小鼠模型的研究结果表明,皮损组织中p-MEK和p-ERK明显增加,且伴随着LMO4表达增加。结论1.IL-6能够活化角质形成细胞内IL-6/MEK/ERK/NF-k B信号通路调控LMO4的表达,从而影响角质形成细胞的增殖和分化。