论文部分内容阅读
表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是茶多酚中主要的功能活性成分，具有消炎、抑菌、防突变、抗癌、抗病毒、抗氧化、神经保护等特性。本文以EGCG含量50%的茶多酚为原料，研究了吸附柱色谱法制备纯化EGCG单体的方法，以及制备出的EGCG单体对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, P. a）生物膜的抑制效果，为其在医药领域的应用提供一些参考。首先，考察选用的吸附填料对儿茶素的选择吸附性，筛选出适合选择性分离儿茶素的极性吸附填料LX-8和中极性吸附填料LSA-10。研究了儿茶素在LSA-10树脂上的吸附行为，为开展动态柱色谱研究提供参考，结果表明：吸附过程在120min后到达平衡，属中速吸附，拟二级动力学模型拟合效果优于拟一级模型，总儿茶素速率常数为0.0019g/mg/min，稍低的温度利于儿茶素在LSA-10树脂上的吸附，较高的儿茶素浓度利于实现酯化和非酯化形式儿茶素的选择性吸附，其吸附行为更符合Freundlich模型，得到EGCG的kF大于43.0473mg(n-1)/n/g/mL-1/n，较其他儿茶素高，说明LSA-10树脂对各儿茶素的吸附有选择性。其次，优化吸附柱色谱法制备纯化EGCG单体的工艺，确定如下工艺条件：先经极性树脂LX-8树脂柱色谱实现非酯化和酯化儿茶素分离，柱体积600mL，300mg/mL茶多酚上样，流速1.5BV/h，上样量60mL，1.5BV/h流速下采用蒸馏水、10%乙醇、25%乙醇和80%乙醇洗脱，体积为4BV、6BV、6BV、4BV，25%乙醇组分干燥后产品中EGCG纯度达(73.13±0.64)%，收率为(61.21±0.48)%。再经中极性树脂LSA-10柱色谱法实现EGCG与ECG分离，柱体积210mL，LX-8柱25%乙醇组分上样，流速1.5BV/h，浓度20mg/mL，上样量1.5BV，1.5BV/h流速下采用5%乙醇、15%乙醇、80%乙醇洗脱，体积为3BV、5BV、3BV，15%乙醇组分干燥产品中EGCG纯度达(93.16±1.04)%，收率为(89.82±0.82)%，结晶后可制备出纯度95.37%的EGCG单体，总收率为49.58%。经放大试验后，得到EGCG单体纯度也可达95%，说明此生产工艺具有放大应用前景，工业化生产可操作性。最后，研究了EGCG对P. a生物膜的抑制效果，结果表明：EGCG对P. a的最小抑菌浓度MIC值为0.125mg/mL，最小抑制生物膜浓度MBIC值为0.0625mg/mL，经MBIC浓度EGCG处理后，P. a毒力因子弹性蛋白酶活性、鼠李糖酯以及绿脓菌素产生被抑制率分别达(37.73±1.25)%、(41.70±1.92)%、(35.98±1.34)%，菌体数量感应信号分子C4-HSL和3-oxo-C12-HSL被抑制率分别达(31.98±1.26)%和(15.91±0.82)%，EGCG可通过抑制菌体数量感应信号分子的产生进而抑制其毒力因子的释放以及生物膜的形成。