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【目的】炎症是机体对内外界有害刺激做出的防御性反应,有助于机体清除病原体和修复组织损伤。但是,过度的炎症反应反而会使组织损伤加重,导致炎症长期存在不能痊愈,从而引起慢性炎症性疾病的发生发展,如动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、炎症性肠病、支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。这些炎症相关疾病具有患病率高、病程长、患病人数多的特点,造成了较大的医疗负担和经济损失。目前研究表明,抗炎治疗在炎症相关疾病的预防和治疗中起到了良好的作用,以炎症为靶向的抗炎治疗成为了炎症相关疾病预防及治疗的新策略。因此,本论文选取中药丹参的活性提取物丹参酮I,利用转基因斑马鱼Tg(corola:eGFP)研究其抗炎作用及其相关机制,并用斑马鱼评价丹参酮I的安全性,为丹参酮I将来应用于临床抗炎治疗提供实验参考,期望能够辅助预防和治疗炎症相关疾病。 【方法】(1)选取受精后0-2h(hpf)的斑马鱼胚胎进行丹参酮I的急性毒性和发育毒性实验,连续观察4天,统计斑马鱼胚胎死亡率、孵化率、畸形率。(2)选取3dpf转基因斑马鱼Tg(coro1a:eGFP)切断尾鳍构建炎症模型,评价丹参酮I对斑马鱼切尾6小时和切尾12小时尾部中性粒细胞和巨噬细胞的抑制作用。(3)选取7-9hpf的斑马鱼胚胎,加入LPS诱导斑马鱼产生炎症,评价丹参酮I对斑马鱼体内氧化应激和一氧化氮(NO)的抑制作用。 【结果】(1)安全性评价结果表明,在24hpf、48hpf、72hpf、96hpf时,丹参酮I对斑马鱼胚胎的半数致死浓度(LC50)均大于50μM,且实验浓度下(≤50μM)的丹参酮I对各个时间段的斑马鱼胚胎致死率均小于5%。在96hpf时,与对照组相比,各个浓度的丹参酮I不影响斑马鱼胚胎的孵化率(P>0.05),表明丹参酮I对斑马鱼孵化酶的活性和运动系统功能无影响。与文献报导的阿司匹林对斑马鱼胚胎的半数致死浓度(11.1μM)相比,丹参酮I的急性毒性相对较小。但是发育毒性结果显示,高浓度丹参酮I(50μM)对48hpf、72hpf、96hpf的斑马鱼胚胎均有致畸作用,畸形主要有心包水肿和脊柱弯曲。(2)抗炎活性评价结果显示,丹参酮I既可以抑制切尾6小时斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞向尾部伤口处聚集,又可以促进切尾12小时斑马鱼尾部中性粒细胞和巨噬细胞的吸收,说明丹参酮I在炎症早期和中后期均能发挥抗炎作用。(3)抗炎分子机制研究结果发现,丹参酮I能够有效抑制斑马鱼体内活性氧(ROS)和NO的产生,表明丹参酮I可以通过抑制ROS和NO的含量减轻炎症反应。 【结论】综上所述,丹参酮I既可以通过减少炎症部位中性粒细胞和巨噬细胞数量来抑制炎症反应,也可以通过抑制ROS和NO的产生发挥抗炎作用。同时,丹参酮I的急性毒性相对较小,具有潜在的临床应用价值。