microRNAs在犬心衰模型中的变化及肝素对其影响的研究

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背景及目的:心力衰竭(心衰)是各种心血管疾病的严重阶段和发展到晚期的共同转归,心衰5年内死亡率接近50%。心力衰竭的发生机制已有研究,但对于心衰预防、早期诊断的研究仍相对较少。microRNAs(miRNAs)是一种高度保守的内源性小分子非编码RNA,在心衰发生和进展过程中在多个方面发挥着重要作用,但miRNAs能否用于心衰的预防和早期诊断目前尚没有相关研究。本研究利用右心室快速起搏制作犬心衰模型,分别检测犬左心室组织及起搏各时间点血浆中几种与心衰相关miRNAs的变化,寻找潜在的心衰生物学指标及治疗靶点。方法:采用完全随机分组设计,将12只杂种犬分为对照组与起搏组,每组6只。植入起搏器,起搏组以240~260次/min频率刺激右心室,对照组起搏器未起搏。送回动物房饲养,每日伤口处酒精擦拭,术后3天注射抗生素,预防感染。分别于术后1天、1周、2周时用EDTA-抗凝管于前肢隐静脉取血5~6ml。在术后2周时测定犬血流动力学指标,处死取左心室心尖部组织。利用RT-qPCR的方法分别检测不同时间点血浆及左心室组织中的miR-21、miR-133a、miR-328、miR-423、miR-499的含量。结果:起搏组与对照组相比左心室组织中的miR-328与miR-499相对表达量明显下降,其差异具有统计学意义(P<0.05);在循环血浆中,miR-21、miR-133a、miR-423a、miR-499在起搏1天时其相对表达量明显升高且具有统计学差异(P<0.05),随着起搏时间的延长,这4种miRNAs的相对表达量逐渐降低,其中miR423a、miR-499相对表达量下降明显,在起搏2周时与对照组相比其差异已无统计学意义。miR-21相对表达量下降较平缓,在起搏2周时与对照组相比其差异仍具有统计学意义(P<0.05)。在循环血浆中miR-328在起搏1天时其相对表达量明显降低且具有统计学差异(P<0.05),随着起搏时间的延长,未发生明显的变化。结论:血浆miR-328水平在本心衰模型中能够反映其在心肌组织中的变化,并且有可能成为潜在的心衰治疗靶点;miR-21、miR-133a、miR-423a、miR-499有可能成为心衰潜在的心衰生物指标。背景及目的:随着介入治疗在心血管领域的不断开展,使得肝素成为治疗心血管疾病中应用最广泛试剂之一。既往有多篇文章报道肝素可以明显抑制PCR扩增效率,这种特性对研究miRNA与心血管疾病的关系造成巨大阻碍,所以搞清楚肝素能影响miRNA的具体范围和机制对其研究具有重要意义。在本研究中我们主要模拟介入环境观察肝素是否会对血浆和组织miRNA提取及PCR扩增效率产生影响。方法:将杂种犬9只,雌雄不分,随机分为两组,对照组(n=5)和实验组(n=4),实验组于右侧股静脉穿刺置管,连接内盛肝素的注射器,回抽见血后推入肝素1ml6000U,再推入肝素盐水2ml,十分钟后用更换注射器从鞘管内抽取静脉血10ml,弃用。再次更换注射器重新从鞘管内抽取6ml静脉血置于EDTA-抗凝管中;对照组犬用新注射器直接从股静脉取血6ml置于EDTA-抗凝管中。用放血休克法处死犬,取犬左心室心尖部组织,应用RT-qPCR法检测实验组和对照组中血浆和组织的miRNA。结果:实验组与对照组比较血浆miRNA Ct值明显增高,其差异具有统计学意义(P<0.01),并且实验组中的所有样品均呈现非特异性扩增,并且扩增曲线相同;组织miRNACt值无明显变化,实验组中所有样品均呈特异性扩增。结论:静脉注射肝素短时间内对血浆miRNA的PCR扩增效率造成明显影响,对组织miRNA提取及PCR扩增效率无明显影响。
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